[發明專利]檢測MYO的時間分辨熒光免疫層析試紙條、試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201611237909.4
• 申請日: 2016-12-28
• 公開（公告）號: CN108254562B
• 公開（公告）日: 2019-11-08
• 發明（設計）人: 徐部灼;宋旭東;黃若磐
• 申請（專利權）人: 廣州瑞博奧生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/558;G01N21/64
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 曾鳳云;萬志香

1.一種檢測MYO的時間分辨免疫層析試紙條，其特征在于，包括底襯、以及依次設在所述底襯上的樣品墊、結合墊、包被膜和吸水紙，所述結合墊上包被有熒光微球標記的MYO單克隆檢測抗體，所述包被膜包括平行設置、且相互間隔的檢測區和對照區，所述檢測區包被有識別單一抗原表位的MYO單克隆捕獲抗體，所述對照區包被有羊抗鼠IgG抗體；所述包被膜為結合聚合物的硝酸纖維膜，所述聚合物為在小于450nm波長具有10％以下透光率，在500nm波長以上具有95％以上的透光率的材料，所述聚合物為聚苯乙烯丙烯腈和聚碳酸酯的一種或兩種。

2.根據權利要求1所述的檢測MYO的時間分辨免疫層析試紙條，其特征在于，所述識別單一抗原表位的MYO單克隆捕獲抗體和羊抗鼠IgG抗體的濃度分別為1.5mg/ml和0.3mg/ml，在所述包被膜上的包被量均為1ul/cm。

3.根據權利要求1所述的檢測MYO的時間分辨免疫層析試紙條，其特征在于，所述結合墊為硝酸纖維膜，所述熒光微球為Eu³⁺鑭系元素熒光微球。

4.根據權利要求3所述的檢測MYO的時間分辨免疫層析試紙條，其特征在于，所述熒光微球的直徑為290nm-350nm。

5.根據權利要求1所述的檢測MYO的時間分辨免疫層析試紙條，其特征在于，所述檢測區靠近所述結合墊，所述對照區靠近所述吸水紙，所述檢測區和所述對照區的間隔為0.3-0.5cm。

6.根據權利要求1-5任一項所述的檢測MYO的時間分辨免疫層析試紙條，其特征在于，檢測區包被有識別單一抗原表位的MYO單克隆捕獲抗體的包被方法如下：

使用含有5％蔗糖的0.02mol/L的pH為7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液，分別將識別單一抗原表位的MYO單克隆捕獲抗體和羊抗鼠IgG抗體分別稀釋到1.5mg/ml和0.3mg/ml的濃度，使用定量噴膜儀以1ul/cm的量將二者以0.5cm的間隔噴于硝酸纖維素膜上，50℃烘干5h。

7.權利要求1-6任一項所述的檢測MYO的時間分辨免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)、在包被膜上分別固定識別單一抗原表位的MYO單克隆捕獲抗體和羊抗鼠IgG抗體，形成檢測區和對照區；

(2)、制備熒光微球標記的MYO單克隆檢測抗體，并噴涂在結合墊上；

(3)、在底襯上搭接粘貼樣品墊、結合墊、包被膜和吸水紙，即得。

8.根據權利要求7所述的檢測MYO的時間分辨免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，步驟(2)中所述熒光標記的MYO單克隆檢測抗體的制備方法包括如下步驟：

(1)、在4℃下，采用0.02-0.05mol/L的pH7.2-7.6的磷酸鹽緩沖液將MYO單克隆檢測抗體透析過夜，再將透析后的MYO單克隆檢測抗體調整至濃度為2-4mg/ml；

(2)、使用0.01-0.05mol/L的pH6.0的MES活化緩沖液洗滌微球，加入碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺，使微球終濃度為0.2mol/L，室溫反應15-30分鐘，充分洗滌微球，用0.02-0.05mol/LpH7.4-7.6的硼酸緩沖液復溶；

(3)、按MYO單克隆檢測抗體與微球的質量比為1:5-6的比例，在復溶后的微球中加入MYO單克隆檢測抗體，室溫反應2小時，加入含有5％BSA的0.02mol/L的pH7.4-7.6的硼酸緩沖液，室溫反應30分鐘，洗滌，再用含有0.5％BSA，0.05％Tween-20的0.02mol/L的pH7.4-7.6的硼酸緩沖液復溶至原體積，使用定量噴膜儀以4ul/cm的量噴涂于玻璃纖維膜上，避光，烘干即得。

9.一種檢測MYO的時間分辨熒光免疫層析試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括塑料卡殼、權利要求1～6任一項所述的試紙條、以及設置于塑料卡殼內的緩沖液袋。

10.根據權利要求9所述的檢測MYO的時間分辨熒光免疫層析試劑盒，其特征在于，所述緩沖液為含有0.5％的BSA、0.05％的吐溫20、0.1-1％還原劑的PBS緩沖液；所述還原劑為還原型谷胱甘肽或抗壞血酸。