[發明專利]一種PCR法檢測漢族人HDV病毒的方法

在審

• 申請號: 201611233460.4
• 申請日: 2016-12-28
• 公開（公告）號: CN107653342A
• 公開（公告）日: 2018-02-02
• 發明（設計）人: 龐劍會
• 申請（專利權）人: 成都百泰賽維生物科技有限公司;龐劍會
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686
• 代理公司: 成都九鼎天元知識產權代理有限公司51214
• 代理人: 房云

1.一種PCR法檢測漢族人HDV病毒的方法，其特征在于：包括以下步驟：

步驟1：合成引物，所述引物包括反轉錄引物和擴增引物組，

所述反轉錄引物的核苷酸序列選自如SEQ ID NO:1所示的序列或如SEQ ID NO:2所示的序列，

所述擴增引物組的核苷酸序列選自如SEQ ID NO:3所示的序列和SEQ ID NO:4所示的序列，或者如SEQ ID NO:5所示的序列和SEQ ID NO:6所示的序列。

步驟2：分離獲得RNA；

步驟3：配制反轉錄反應體系，進行反轉錄反應，獲得cDNA；

步驟4：配制PCR擴增反應體系，進行PCR擴增反應，PCR檢測。

2.根據權利要求1所述的一種PCR法檢測漢族人HDV病毒的方法，其特征在于：所述反轉錄引物的核苷酸序列為SEQ ID NO:1所示的序列，所述擴增引物組的核苷酸序列為SEQ ID NO:3所示的序列和SEQ ID NO:4所示的序列。

3.根據權利要求1所述的一種PCR法檢測漢族人HDV病毒的方法，其特征在于：所述反轉錄引物的核苷酸序列為SEQ ID NO:2所示的序列，所述擴增引物組的核苷酸序列為SEQ ID NO:5所示的序列和SEQ ID NO:6所示的序列。

4.根據權利要求1-3任意一項所述的一種PCR法檢測漢族人HDV病毒的方法，其特征在于：所述步驟1合成的所述引物的濃度均為10pmol/μl。

5.根據權利要求4所述的一種PCR法檢測漢族人HDV病毒的方法，其特征在于：所述步驟3中，所述配制反轉錄反應體系即將5μl所述步驟2得到RNA液加入到反轉錄反應體系中，所述反轉錄反應體系包括以下組分：

所述反轉錄反應的條件為25℃60min，65℃5min。

6.根據權利要求5所述的一種PCR法檢測漢族人HDV病毒的方法，其特征在于：所述步驟4中，所述配制PCR擴增反應體系即將5μl所述步驟3得到cDNA液加入到擴增反應體系中，所述擴增反應體系包括以下組分：

所述擴增反應的條件為95℃2min；95℃30s，58.3℃30s，72℃10s，循環30次；2℃5min，4℃保存。

7.根據權利要求6所述的一種PCR法檢測漢族人HDV病毒的方法，其特征在于：所述步驟4中，所述PCR檢測為1.5％瓊脂糖凝膠電泳檢測。

8.根據權利要求7所述的一種PCR法檢測漢族人HDV病毒的方法，其特征在于：所述1.5％瓊脂糖凝膠電泳檢測條件為：配制0.5×TBE的電泳緩沖液，所述1.5％瓊脂糖凝膠的溶液中含有萬分之一體積Gold View，所述電泳條件為120V/20min，取8μl所述PCR擴增反應后的產物電泳，跑膠完成后，于紫外燈下顯影。