[發明專利]智利江蘺原生質體的制備方法

有效

• 申請號: 201611230340.9
• 申請日: 2016-12-27
• 公開（公告）號: CN106893690B
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 劉濤;金月梅
• 申請（專利權）人: 中國海洋大學
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04
• 代理公司: 北京精金石知識產權代理有限公司 11470
• 代理人: 劉曄

1.一種智利江蘺原生質體的制備方法，所述制備方法包括組織酶液制備、智利江蘺組織酶解等步驟，所述組織酶液制備步驟為：將其用1-10倍海參腸體積的海水0℃勻漿破碎；在4℃下浸提4-18h，然后將浸提液調pH值至7.0-8.0，冷凍離心5min，取上層清液即得海參酶液；將海參酶液、纖維素酶和海水混合后即得組織酶液；

所述組織酶液的具體組成為2.4ml纖維素酶、0.5ml海參酶液和17.1ml消毒海水。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述組織酶液制備步驟為：將其用2倍海參腸體積的海水0℃勻漿破碎；在4℃下浸提12h，然后將浸提液調pH值至7.6，冷凍離心5min，取上層清液即得海參酶液；將海參酶液、纖維素酶和海水混合后即得組織酶液。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述智利江蘺組織酶解步驟為取智利江蘺組織用解剖刀將藻體切碎，加入制備好的組織酶液進行酶解，然后用200目的篩絹進行過濾，去除未消化的細胞、細胞團和碎片，去上清液離心，800rpm離心10min，使單細胞原生質體下沉，細胞碎片留在上清液中，棄去上清液，用含有1mol/L的葡萄糖的消毒海水進行沖洗離心2-3次，收集沉淀后懸浮至2ml，即得原生質體。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述酶解條件為添加組織酶液的藻體組織放入25℃的恒溫搖床上進行黑暗酶解5h。