[發明專利]一種檢測嵌合抗原受體T細胞對肝癌細胞抑制作用的模型和方法

在審

• 申請號: 201611227743.8
• 申請日: 2016-12-27
• 公開（公告）號: CN106619719A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 李鵬;蔣治武;吳迪;林思妙;李柏衡;王素娜;吳綺婷;陳冬梅;姚瑤
• 申請（專利權）人: 中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院
• 主分類號: A61K35/17
• 分類號: A61K35/17;A61P35/00;A61D1/00;A61D7/00;A01K67/02
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司11332
• 代理人: 鞏克棟,侯桂麗

技術領域

本發明涉及腫瘤的細胞免疫治療領域，尤其涉及一種檢測嵌合抗原受體T細胞對肝癌細胞抑制作用的模型和方法。

背景技術

肝癌是亞洲死亡率最高的癌癥之一。目前，肝癌有效的治療方法是部分肝臟切除、肝臟移植、化療、動脈化療栓塞。盡管在肝癌診斷和治療上都有許多的新發現，然而，肝癌的五年生存率仍然只有10％。目前，許多新的潛在免疫治療手段都開展了臨床試驗，如CAR T細胞免疫治療、免疫抑制檢查點抗體。鑒于低生存率，嚴謹而有效模擬人體的臨床前評估模型是目前肝癌治療研發平臺的緊急需求。

然而對于實體瘤而言，嵌合抗原受體(Chimeric Antigen Receptor，CAR)T細胞的臨床前試驗結果與臨床試驗結果存在著巨大的差異，導致目前通過臨床審批、成為上市藥物的實體瘤CAR T細胞治療寥寥可數。而CAR T細胞的臨床前和臨床治療結果差異巨大的原因還未知，但可能是多因素影響的。

通過對比血液腫瘤和實體瘤之間的差異，推測實體瘤體內微環境中可能存在的CAR T細胞阻礙：1)突破實體瘤組織物理屏障，腫瘤組織存在妨礙CAR T細胞浸潤至腫瘤部位的物理屏障；2)腫瘤代謝微環境中相對酸性、缺乏氧和營養物質，阻礙CAR T細胞生存、增殖和殺傷作用；3)腫瘤抑制性分泌因子和細胞因子的免疫抑制作用；4)免疫抑制細胞，如調節性T細胞(Regulatory T cells，Tregs)、髓系來源的抑制性細胞(myeloid-derived suppressor cells，MDSCs)、腫瘤相關巨噬細胞(tumor-associated macrophages，TAMs)和嗜中性粒細胞(Neutrophils，TANs)。而以上列舉的條件是常規實體瘤細胞系構建的異種移植小鼠模型無法重現的，導致實體瘤CAR T細胞療效的臨床前評估不準確，臨床前和臨床治療結果差異懸殊。

現有技術中存在的都是將肝癌細胞系體外識別殺傷評估和肝癌細胞系體內識別殺傷評估，而肝癌細胞系的體內識別殺傷評估是現有的CAR T細胞臨床前療效評估方法。然而該方法無法有效模擬CAR T細胞對肝癌異質性、腫瘤組織物理屏障和代謝屏障、免疫抑制微環境等效應的療效。對于CAR T細胞，原代腫瘤細胞異質性將可能是CAR T細胞治療耐藥的重要原因之一，而腫瘤細胞系構建的療效評估模型卻無法重現的腫瘤異質性對CAR T細胞的耐藥作用。由此可見，實體瘤CAR T細胞的臨床前評估方法并未成熟，亟需發現新的方法。

此外，肝癌又是實體瘤中的一個特殊例子。因為而肝臟組織是一個特殊的器官，參與人體造血過程。肝臟亦被稱為免疫幸免器官，即肝臟移植發生移植物排斥宿主疾病的概率遠遠低于其它器官移植，但具體的作用機制并未見報道。但由此可推知，肝臟組織存在某種緩解免疫效應的作用機制。

CN 102178568 A公開了一種用于研究肝細胞肝癌上皮間質樣變動態過程的動物模型的方法，取實驗動物，在超聲設備引導下肝臟原位接種腫瘤細胞，動態觀察上皮間質樣變相關指標變化以及肺轉移情況。但其無法用來評估CAR T細胞在體內的療效。CAR T細胞對人體肝癌的臨床治療則可能受到更強烈的免疫抑制作用，靶向肝癌的CAR T細胞對肝癌臨床前評估模型的要求更高。

發明內容

針對目前靶向肝癌CAR T細胞臨床前評估手段無法有效模擬和評估肝癌CAR T細胞的體內療效，本發明提供一種檢測嵌合抗原受體T細胞對肝癌細胞抑制作用的模型和方法，通過在高度免疫缺陷小鼠體內移植肝癌病人來源的腫瘤組織塊，并將肝癌CAR T細胞移植到免疫缺陷小鼠體內，構建原代肝癌異種移植模型，并利用該模型評估靶向肝癌CAR T細胞的臨床前療效。

為達此目的，本發明采用以下技術方案：

一方面，本發明提供一種檢測嵌合抗原受體T細胞對肝癌細胞抑制作用的模型，所述模型為通過將所述原代肝癌組織移植到模型生物體內，再將嵌合抗原受體T細胞移植到模型生物體內而獲得。

優選地，所述原代肝癌組織移植的體積為1-5mm³，例如可以是1mm³、2mm³、3mm³、4mm³、5mm³，優選為2-3mm³。

優選地，所述原代肝癌組織移植的數量為1-5塊，例如可以是1塊、2塊、3塊、4塊、5塊，優選為2-3塊。