[發明專利]一種檢測嵌合抗原受體T細胞對肝癌細胞抑制作用的模型和方法

在審

• 申請號: 201611227743.8
• 申請日: 2016-12-27
• 公開（公告）號: CN106619719A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 李鵬;蔣治武;吳迪;林思妙;李柏衡;王素娜;吳綺婷;陳冬梅;姚瑤
• 申請（專利權）人: 中國科學院廣州生物醫藥與健康研究院
• 主分類號: A61K35/17
• 分類號: A61K35/17;A61P35/00;A61D1/00;A61D7/00;A01K67/02
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司11332
• 代理人: 鞏克棟,侯桂麗

1.一種檢測嵌合抗原受體T細胞對肝癌細胞抑制作用的模型，其特征在于，所述模型為通過將所述原代肝癌組織移植到模型生物體內，再將嵌合抗原受體T細胞移植到模型生物體內而獲得。

2.根據權利要求1所述的模型，其特征在于，所述原代肝癌組織移植的體積為1-5mm³，優選為2-3mm³；

優選地，所述原代肝癌組織移植的數量為1-5塊，優選為2-3塊；

優選地，所述嵌合抗原受體T細胞移植的數量為(1-4)×10^-6，優選為2×10^-6；

優選地，所述原代肝癌組織為邊緣淡黃色組織和/或中間白色組織，優選為邊緣淡黃色組織；

優選地，所述將所述原代肝癌組織移植到模型生物體內的移植方式為皮下移植、腎囊膜下移植或肝臟原位移植中的一種或至少兩種的組合，優選為肝臟原位移植。

3.根據權利要求1或2所述的模型，其特征在于，所述嵌合抗原受體T細胞在所述原代肝癌組織移植到模型生物體內的5-10天后進行移植，優選為6-8天進行移植，進一步優選為7天；

優選地，所述嵌合抗原受體T細胞進行多次移植，優選為進行2-4次移植，進一步優選為進行2次移植；

優選地，所述嵌合抗原受體T細胞進行多次移植，其中相鄰兩次移植的間隔時間為5-10天，優選為6-8天，進一步優選為7天。

4.根據權利要求1-3中任一項所述的模型，其特征在于，所述模型生物體為兔、鼠、貓、狗或猴中的任意一種或至少兩種組合的模型，優選為免疫缺陷型小鼠模型，進一步優選為NOD/SCID、Rag2-/-IL2rg-/-、Rag1/-IL2rg-/-、NOD/SCID IL2rg-/-小鼠模型，最優選為NOD/SCID IL2rg-/-小鼠模型。

5.根據權利要求1-4中任一項所述的模型，其特征在于，所述嵌合抗原受體T細胞為特異性識別肝癌細胞的嵌合抗原受體T細胞；

優選地，所述嵌合抗原受體T細胞中的嵌合抗原受體主要包括信號肽、抗原識別區、跨膜區和胞內區串聯構成；其中，所述胞內區主要包括人4-1BB胞內區。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的模型，其特征在于，所述抗原識別區為抗GPC3抗體、CD133、MUC1或CEA中的任意一種或至少兩種的組合，優選為抗GPC3抗體；

優選地，所述信號肽為人IgM信號肽和/或人CD8α信號肽，優選為人IgM信號肽；

優選地，所述的跨膜區為人CD28跨膜區和/或人CD8跨膜區，優選為人CD28跨膜區；

優選地，所述胞內區還包括人CD28胞內區、人CD3ζ胞內區或人4-1BB胞內區中的任意一種或至少兩種的組合，優選為人CD28胞內區和人CD3ζ胞內區的組合；

優選地，所述胞內區為人CD28胞內區、人4-1BB胞內區和人CD3ζ胞內區串聯構成。

7.根據權利要求1-6中任一項所述的模型，其特征在于，所述嵌合抗原受體由人IgM信號肽、抗GPC3抗體、人CD28跨膜區和胞內區、人4-1BB胞內區和人CD3ζ胞內區串聯構成；

優選地，所述嵌合抗原受體的氨基酸序列為SEQ ID NO.1，核酸序列為SEQ ID NO.2。

8.一種檢測嵌合抗原受體T細胞對肝癌細胞抑制作用的方法，其特征在于，包括如下步驟：通過檢測權利要求1-7中任一項所述的模型生物體內皮下肝癌腫瘤組織塊來判斷嵌合抗原受體T細胞對肝癌細胞抑制作用。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述檢測的方式為量取肝癌腫瘤組織塊大小、稱量肝癌腫瘤組織塊重量、熒光素酶-活體成像技術或流式細胞儀和免疫組化技術中的任意一種或至少兩種的組合；

優選地，所述量取肝癌腫瘤組織塊大小的方式為游標卡尺；

優選地，所述腫瘤組織塊的檢測時間為多次移植完嵌合抗原受體T細胞后進行，每2-5天，優選3天量取一次。

10.如權利要求1-7中任一項所述的模型或如權利要求8或9所述的方法在評估CAR T細胞對肝癌細胞抑制效果中的應用。