[發(fā)明專利]一種人脂蛋白相關磷脂酶A2免疫層析試紙條的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611227058.5
• 申請日: 2016-12-27
• 公開（公告）號: CN106841612B
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發(fā)明（設計）人: 鄭樂民;段學軍;程絲;賈志磊;王洋;閆寶山;聶慧娟;孫龍鵬
• 申請（專利權）人: 福建普立辰生物技術有限公司;鄭樂民
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/577
• 代理公司: 北京英創(chuàng)嘉友知識產權代理事務所(普通合伙) 11447
• 代理人: 耿超;王浩然

1.一種人脂蛋白相關磷脂酶A₂免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，所述免疫層析試紙條包括依次相連接的樣品墊、標記抗體墊、抗體包被硝酸纖維素膜和吸收墊；所述標記抗體墊中含有60-80μg的膠體金或熒光標記的人脂蛋白相關磷脂酶A₂的第一單克隆抗體；所述制備方法包括抗體包被硝酸纖維素膜的制備和免疫層析試紙條的組裝，所述抗體包被硝酸纖維素膜的制備包括如下步驟：

S1.將1-2mg/mL的人脂蛋白相關磷脂酶A₂的第二單克隆抗體溶液和0.3-0.7％(W/V)的3-氨基丙基三乙氧基硅烷磷酸鹽緩沖液按照體積比1：(4-6)混合均勻，得到3-氨基丙基三乙氧基硅烷/抗體包被溶液；

S2.使用濃度為0.01-0.03M且pH值為7.1-7.6的磷酸鹽緩沖液稀釋兔抗鼠IgG至0.5-1.0mg/mL，得到兔抗鼠IgG磷酸鹽緩沖液；

S3.將3-氨基丙基三乙氧基硅烷/抗體包被溶液使用定點噴膜儀均勻噴霧于硝酸纖維素膜上的一處作為檢測線，并且將兔抗鼠IgG磷酸鹽緩沖液使用定點噴膜儀均勻噴霧于硝酸纖維素膜上的另一處作為質控線，檢測線與質控線之間間隔0.5cm-1.0cm，隨后置于36-38℃烘干1.5-2.5h，得到烘干后的硝酸纖維素膜；

S4.烘干后的硝酸纖維素膜在室溫下依次置于0.01-0.03M且pH值為7.1-7.6的磷酸鹽緩沖液、含有0.4-0.6％(W/V)牛血清白蛋白和3-5％(W/V)蔗糖的磷酸鹽緩沖液、雙蒸水中處理，處理完成后于36-38℃通風干燥100-140min，得到抗體包被硝酸纖維素膜；

人脂蛋白相關磷脂酶A₂的第一單克隆抗體為購自Meridian Life Science公司克隆號H01390M的單克隆抗體；人脂蛋白相關磷脂酶A₂的第二單克隆抗體為購自Meridian LifeScience公司克隆號H01392M的單克隆抗體。

2.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其中，步驟S3中所述3-氨基丙基三乙氧基硅烷/抗體包被溶液與兔抗鼠IgG磷酸鹽緩沖液的噴涂速度為0.8-1.2μL/cm。

3.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其中，步驟S4中使用所述0.01-0.03M且pH值為7.1-7.6的磷酸鹽緩沖液漂洗2-4次。

4.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其中，步驟S4中使用含有0.4-0.6％(W/V)牛血清白蛋白和3-5％(W/V)蔗糖的磷酸鹽緩沖液處理10-20min。

5.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其中，步驟S4中使用雙蒸水漂洗2-4次。

6.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其中，所述樣品墊、標記抗體墊、抗體包被硝酸纖維素膜和吸收墊的長度比為(15-20):(10-12):(22-26):(18-22)。

7.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其中，所述樣品墊為無紡布、聚酯膜、纖維素濾紙或玻璃纖維素膜；所述標記抗體墊為玻璃纖維素膜、聚酯膜、纖維素濾紙或無紡布；所述熒光標記為含鑭系元素的聚苯乙烯熒光微球。

8.根據(jù)權利要求1所述的制備方法，其中，所述吸收墊為吸水濾紙。

9.權利要求1-8中任意一項制備方法制備得到的人脂蛋白相關磷脂酶A₂的免疫層析試紙條。