[發明專利]一種人脂蛋白相關磷脂酶A2免疫層析試紙條的制備方法

有效

• 申請號: 201611227058.5
• 申請日: 2016-12-27
• 公開（公告）號: CN106841612B
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發明（設計）人: 鄭樂民;段學軍;程絲;賈志磊;王洋;閆寶山;聶慧娟;孫龍鵬
• 申請（專利權）人: 福建普立辰生物技術有限公司;鄭樂民
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/577
• 代理公司: 北京英創嘉友知識產權代理事務所(普通合伙) 11447
• 代理人: 耿超;王浩然

本公開公開了一種人脂蛋白相關磷脂酶A₂免疫層析試紙條的制備方法，所述免疫層析試紙條包括依次相連接的樣品墊、標記抗體墊、抗體包被硝酸纖維素膜和吸收墊；所述標記抗體墊中含有60?80μg的膠體金或熒光標記的人脂蛋白相關磷脂酶A₂的第一單克隆抗體；所述制備方法包括抗體包被硝酸纖維素膜的制備和免疫層析試紙條的組裝，本公開所述抗體包被硝酸纖維素膜的制備中使用3?氨基丙基三乙氧基硅烷，使制備得到的人脂蛋白相關磷脂酶A₂免疫層析試紙條的靈敏性提高。

技術領域

本公開涉及生物技術領域，具體地，涉及一種人脂蛋白相關磷脂酶A₂免疫層析試紙條的制備方法。

背景技術

人脂蛋白相關磷脂酶A₂(Lp-PLA₂)，又稱為血小板活化因子乙酰水解酶，由成熟的巨噬細胞和淋巴細胞合成和分泌，受到炎性介質的調節。Lp-PLA₂能夠水解低密度脂蛋白上的氧化卵磷脂，生成促炎物質，所以具有促炎癥和促動脈粥樣硬化的作用，當動脈粥樣硬化的炎癥發展到后期，將要或者已經出現像血管內腔破裂時，Lp-PLA₂會被大量釋放進血液中，致使血液中的Lp-PLA₂濃度大幅增加，因此Lp-PLA₂在血液中的濃度能夠反映動脈粥樣硬化形成的斑塊的炎癥程度。通過檢測血液中的Lp-PLA₂，可以有效了解動脈粥樣硬化斑塊的炎癥程度和穩定性，預警心肌梗死和腦血栓的發生，對于預防心腦血管突發事件具有重要意義。

目前，免疫層析試紙條為用來檢測Lp-PLA₂在血液中的濃度，但是傳統方法制備得到的免疫層析試紙條雖然使用簡易、快捷，但是存在準確度和靈敏度不夠的缺點。開發一種新的人脂蛋白相關磷脂酶A₂的免疫層析試紙條的制備方法提高檢測的準確度和靈敏度是亟需的。

發明內容

本公開的目的是提供一種人脂蛋白相關磷脂酶A₂免疫層析試紙條的制備方法，該制備方法可以提高檢測的準確度和靈敏度。

為了實現上述目的，本公開提供一種人脂蛋白相關磷脂酶A₂免疫層析試紙條的制備方法，其特征在于，所述免疫層析試紙條包括依次相連接的樣品墊、標記抗體墊、抗體包被硝酸纖維素膜和吸收墊；所述標記抗體墊中含有60-80μg的膠體金或熒光標記的人脂蛋白相關磷脂酶A₂的第一單克隆抗體；所述制備方法包括抗體包被硝酸纖維素膜的制備和免疫層析試紙條的組裝，所述抗體包被硝酸纖維素膜的制備包括如下步驟：

S1.將1-2mg/mL的人脂蛋白相關磷脂酶A₂的第二單克隆抗體溶液和0.3-0.7％(W/V)的3-氨基丙基三乙氧基硅烷磷酸鹽緩沖液按照體積比1：(4-6)混合均勻，得到3-氨基丙基三乙氧基硅烷/抗體包被溶液；

S2.使用濃度為0.01-0.03M且pH值為7.1-7.6的磷酸鹽緩沖液稀釋兔抗鼠IgG至0.5-1.0mg/mL，得到兔抗鼠IgG磷酸鹽緩沖液；

S3.將3-氨基丙基三乙氧基硅烷/抗體包被溶液使用定點噴膜儀均勻噴霧于硝酸纖維素膜上的一處作為檢測線，并且將兔抗鼠IgG磷酸鹽緩沖液使用定點噴膜儀均勻噴霧于硝酸纖維素膜上的另一處作為質控線，檢測線與質控線之間間隔0.5cm-1.0cm，隨后置于36-38℃烘干1.5-2.5h，得到烘干后的硝酸纖維素膜；

S4.烘干后的硝酸纖維素膜在室溫下依次置于0.01-0.03M且pH值為7.1-7.6的磷酸鹽緩沖液、含有0.4-0.6％(W/V)牛血清白蛋白和3-5％(W/V)蔗糖的磷酸鹽緩沖液、雙蒸水中處理，處理完成后于36-38℃通風干燥100-140min，得到抗體包被硝酸纖維素膜。

本公開還提供了上述制備方法制備得到的人脂蛋白相關磷脂酶A₂免疫層析試紙條。