[發(fā)明專利]一種生物催化拆分賴諾普利氫化物的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611224970.5
• 申請(qǐng)日: 2016-12-27
• 公開（公告）號(hào): CN107058453B
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張利坤;肖延銘;錢敏帆;楊衛(wèi)華;談聰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 長(zhǎng)興制藥股份有限公司
• 主分類號(hào): C12P41/00
• 分類號(hào): C12P41/00;C12P13/02;C12N1/20;C12N9/20;C12N11/14;C12N11/082;C12R1/01
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務(wù)所有限公司 33214
• 代理人: 高濱

本發(fā)明屬于生物催化技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種生物催化拆分賴諾普利氫化物的方法。一種生物催化拆分賴諾普利氫化物的方法，該方法以賴諾普利氫化物為底物原料，加入合適體積的水，在脂肪酶存在的條件下發(fā)生選擇性酯水解(R,S)?賴諾普利氫化物，保留(S,S)?賴諾普利氫化物；反應(yīng)完全后，將混合液分離，獲得(S,S)?賴諾普利氫化物。本發(fā)明具有催化效率高、立體選擇性好、酶與底物易于分離且酶可重復(fù)使用、成本低、環(huán)境污染小等優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物催化技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種生物催化拆分賴諾普利氫化物的方法。

背景技術(shù)

賴諾普利(Lisinopril)，化學(xué)名稱為N-{N-[(S)-1-羧基-3-苯丙基]-L-賴氨酰}-L-脯氨酸，是依那普利拉的賴氨酸衍生物，1987年由默克公司研發(fā)上市的第三代血管緊張素Ⅱ轉(zhuǎn)換酶抑制劑(angiotensin-converting enzyme inhibitor，ACEI)，主要用于治療高血壓，抑制ACE以減少血管緊張素I(AngI)向血管緊張素II(AngII)的轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致AngII濃度降低，從而使AngII的升壓作用及醛固酮分泌作用下降。還有降低左心室重量指數(shù)(LVMI)、改善左心室功能、降低急性心肌梗死患者死亡率，以及顯著降低尿白蛋白排泌率等作用。

賴諾普利氫化物是合成賴諾普利工藝中的關(guān)鍵手性中間體，其有2個(gè)手性位點(diǎn)，分為(R,S)-型和(S,S)-型，合成賴諾普利后續(xù)反應(yīng)所需的構(gòu)型為(S,S)-型。本發(fā)明選用的賴諾普利氫化物為混合物，其(S,S)-型∶(R,S)-型含量比為2～3:1，二者的結(jié)構(gòu)式如下。

隨著醫(yī)藥技術(shù)的不斷發(fā)展，人們對(duì)手性藥物安全性的認(rèn)識(shí)逐漸深入，手性藥物的市場(chǎng)不斷擴(kuò)大，世界醫(yī)藥領(lǐng)域?qū)κ中运幬锏拈_發(fā)正形成一股潮流。不對(duì)稱合成和拆分技術(shù)的研究已經(jīng)成為焦點(diǎn)，其中化學(xué)合成手性藥物是利用手性源、手性助劑、手性催化劑以及各種中間體等，通過不對(duì)稱合成得到手性藥物。盡管化學(xué)合成方法日趨成熟，但是手性藥物種類多樣、更新迅速，化學(xué)合成的應(yīng)用有一定的局限性，并且化學(xué)合成方法造成的環(huán)境問題不容忽視。因此，利用生物系統(tǒng)的多樣性和安全性來獲得光學(xué)純藥物已成為另一選擇，特別是一些微生物產(chǎn)生酯酶/脂肪酶用于生產(chǎn)手性藥物的單一對(duì)映體是化學(xué)合成之外的重要途徑，已經(jīng)越來越受到人們關(guān)注。

目前關(guān)于賴諾普利的合成路線主要是以3-苯甲酰丙烯酸乙酯為起始原料，與三氟乙酰賴氨酸在氫氧化鋰的作用下，發(fā)生不對(duì)稱加成反應(yīng)，再經(jīng)Pd/C氫化還原、環(huán)合、縮合、水解等反應(yīng)過程制備得到，此工藝通過不對(duì)稱加成反應(yīng)選擇性較低，(S,S)-型∶(R,S)-型含量比通常為75：25。為目前工業(yè)生產(chǎn)上采用的主要方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種生物催化拆分賴諾普利氫化物的方法，不同于傳統(tǒng)化學(xué)拆分法，獲得光學(xué)純度較高的(S,S)-賴諾普利氫化物，且將細(xì)胞固定化后減少產(chǎn)物中菌體自身降解產(chǎn)生的雜質(zhì)，且易于分離。

為達(dá)到上述的發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

一種生物催化拆分賴諾普利氫化物的方法，該方法以賴諾普利氫化物為底物原料，加入合適體積的水，在脂肪酶存在的條件下發(fā)生選擇性酯水解(R,S)-賴諾普利氫化物，保留(S,S)-賴諾普利氫化物；反應(yīng)完全后，將混合液分離，獲得(S,S)-賴諾普利氫化物；所述脂肪酶采用通過不動(dòng)桿菌(Acinetobacter sp.)Cxzy-L119產(chǎn)生的胞內(nèi)脂肪酶，該菌種保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中國(guó).武漢.武漢大學(xué)，郵編：430072，保藏日期：2016年10月17日，保藏編號(hào)：CCTCC NO：M 2016572。

作為優(yōu)選，所述反應(yīng)時(shí)間為4～36h、反應(yīng)溫度為35～38℃，反應(yīng)pH維持在7.0～7.3。作為再優(yōu)選，反應(yīng)過程用15％Na₂CO₃(V/V)溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)pH。

作為優(yōu)選，所述賴諾普利氫化物在反應(yīng)體系濃度10～80g/L，優(yōu)選為40～60g/L。