[發明專利]一種構建FFPE樣本DNA文庫的方法

在審

• 申請號: 201611222985.8
• 申請日: 2016-12-27
• 公開（公告）號: CN108251515A
• 公開（公告）日: 2018-07-06
• 發明（設計）人: 劉偉;王秀莉;董超;玄兆伶;李大為;梁峻彬;陳重建
• 申請（專利權）人: 安諾優達基因科技（北京）有限公司;浙江安諾優達生物科技有限公司;安諾優達（義烏）醫學檢驗有限公司
• 主分類號: C12Q1/6869
• 分類號: C12Q1/6869;C40B50/06;C40B40/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種構建FFPE樣本DNA文庫的方法，其包括：

步驟A：提取FFPE樣本的DNA，得到樣本基因組DNA片段；

步驟B：將樣本基因組DNA片段進行末端修復，純化得到平末端DNA片段；

步驟C：將平末端DNA片段進行3'端加A，得到3'端加A的DNA片段；

步驟D：將加3'端加A的DNA片段進行加接頭，純化得到加接頭DNA片段；

步驟E：將加接頭DNA片段進行PCR擴增，純化得到DNA片段文庫，

其中，步驟D中的純化采用0.9×磁珠純化。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟B中的純化采用1.8×磁珠純化，步驟E中的純化采用0.9×磁珠純化。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述FFPE樣本為低質量FFPE樣本。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟A中樣本DNA片段的量為1μg。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟C反應中加A采用Klenow片段(3'-5'exo-)，所述Klenow片段的使用量為1～2μL，優選地使用量為1.5～2μL。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟D中加接頭使用T4DNA連接酶，所述T4DNA連接酶的使用量為6～7.5μL、優選地使用量為6.5～7μL，所述接頭使用量為40～100pmol，優選地接頭使用量為40～80pmol。

7.一種建庫用試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：用于末端修復的試劑、用于加A的試劑、用于加接頭的試劑、用于PCR擴增的試劑和用于純化的試劑。

8.一種測序用DNA文庫，其是通過權利要求1～6任一項所述的方法構建的。

9.一種DNA文庫的測序方法，其特征在于，采用權利要求8所述的文庫為對象進行測序。