[發明專利]一種檢測飼料中多種脂溶性維生素的方法

有效

• 申請號: 201611219813.5
• 申請日: 2016-12-26
• 公開（公告）號: CN106770769B
• 公開（公告）日: 2019-10-18
• 發明（設計）人: 朱正鵬;梁玉樹;何開蓉;易錫斌;張遨然;汪春霞;王虎;周麗;黃李蓉;梁秋菊
• 申請（專利權）人: 新希望六和股份有限公司;四川新希望畜牧科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 四川力久律師事務所 51221
• 代理人: 王蕓;熊曉果

本發明公開了一種檢測飼料中多種脂溶性維生素的方法，包括以下步驟：（1）根據檢測需要，制備多種維生素標準溶液，包括以下維生素中的至少兩種以上：維生素A醋酸酯、維生素D₃、維生素E乙酸酯；采用HPLC?MS/MS檢測標準溶液，得到標準曲線方程；（2）稱取樣品，到棕色容量瓶中，加入提取溶液超聲提取10?30min，冷卻定容，離心，用0.22μm有機相濾膜，過濾上機，采用與步驟1相同的色譜參數和質譜檢測參數進行分析測試；（3）根據步驟1和步驟2的檢測結果計算得出樣品中的多種維生素的含量。本發明的同時檢測配合飼料中的多種脂溶性維生素的方法，在一次檢測分析過程中完成多種不同的維生素的檢測分析。

技術領域

本發明涉及一種色譜檢測分析方法，特別涉及一種檢測維生素的色譜檢測方法，對于脂溶性維生素具有良好的檢測分析效率，屬于化學成分分析技術領域。

背景技術

脂溶性維生素包括VA、VD、VE、VK，由于其化學結構多含疏水性的烴鏈，不溶于水，易溶于有機溶劑。由于溶解性的差異，其檢測方法與水溶性維生素也有所不同，特別是樣品前處理所用的試劑類型，應當與有機溶劑為主。

目前關于水溶性維生素的檢測方法相對完整，如滴定法、比色法、分光光度法以及上文中提到的高效液相色譜法和反相高效液相色譜法等。而對于脂溶性維生素來說，盡管存在檢測單一成分的方法，但同時檢測的方法相對較少。

王海鳳等2006年建立了高效液相色譜法同時檢測注射用復方維生素中維生素A棕櫚酸酯、維生素D₂、維生素E、維生素K1的含量，各維生素的平均回收率分別為99.7％，98.4％，100.8％和98.5％，方法操作簡便，結果準確。

劉紅河等2005年建立反相高效液相色譜-二極管陣列檢測法(HPLC-DAD)同時測定食品中維生素A、維生素D和維生素E(α-生育酚)的含量。該方法將食品樣品加入乙醇、氫氧化鉀及焦性沒食子酸，80℃水浴皂化30min，石油醚提取后，氮氣吹掃濃縮致干后用流動相溶解，用Supelco C18柱(15cm×4.6mm，5um)色譜柱，以甲醇為流動相，在325nm(VA)、265nm(VD)、294nm(VE)檢測波長下進行檢測。

譚青松等2007年采用一次進樣同時檢測魚體組織中的維生素A、維生素D3和維生素E的方法。以石油醚提取魚體組織中的脂溶性維生素，用VARIAN Res Elut 5μCl8 90A色譜柱，流動相為甲醇-水，此條件下對提取物中的3種脂溶性維生素能夠進行良好的分離。結果表明，在292nm波長下，維生素A、維生素D3和維生素E線性關系良好。以石油醚提取魚體組織中的脂溶性維生素，采用反相高效液相色譜儀在波長292nm處可同時對魚體組織中維生素A、維生素D3和維生素E進行較好的分離和測定。

宋金春等2007年建立以高效液相色譜法同時測定注射用12種復合維生素中維生素D2、維生素A與維生素E含量的方法。方法以色譜柱為Inertsil(ODS-2)C18，流動相為乙腈-甲醇-二氯甲烷(80:10:10)，結果表明：維生素D2、維生素E醋酸酯與維生素A棕櫚酸酯檢測濃度的線性范圍分別為0.61～1.43μg/mL、222.6-519.4μg/mL和1.21-2.82mg/mL；平均回收率分別為99.79％、99.53％、101.63％。

盧燕等2012年采用雙三元高效液相色譜多閥多柱技術，對同一樣品中水溶性維生素和脂溶性維生素不同方法處理得到的樣品進行雙進樣，可同時分析樣品中21種維生素。各維生素的方法檢出限可達0.002～0.223μg.mL-1范圍，本方法可用于多種樣品的維生素檢測和分析工作。