[發明專利]促進土黨參離體增殖的套盒和方法

有效

• 申請號: 201611219707.7
• 申請日: 2016-12-26
• 公開（公告）號: CN106804426B
• 公開（公告）日: 2019-07-30
• 發明（設計）人: 胡秀;馮敏;許炳強;梁韓枝;其他發明人請求不公開姓名
• 申請（專利權）人: 中國科學院華南植物園
• 主分類號: C12N5/04
• 分類號: C12N5/04;A01H4/00;A01G24/10;A01G24/28;A01G22/25
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 宋靜娜;郝傳鑫

本發明公開了一種促進土黨參離體增殖的套盒，套盒包含用以誘導出帶不定芽塊的莖段的培養基1和用以反復繼代培養培養基2，培養基1和培養基2均包含以下組分：6?芐基氨基嘌呤、噻苯隆和MS培養液；同時，本發明公開了一種促進土黨參離體增殖的方法。采用本發明的套盒和方法，解決了采用NAA和BA配比進行繁殖的過程中，繁殖苗細弱、枯黃、死亡以及繁殖率低的問題；以30天為培養周期，利用本發明的套盒可以使土黨參的繁殖倍率達到10?15倍，并獲得健壯無菌苗，生根率和移栽成活率均為100％。

技術領域

本發明涉及植物組織培養技術領域，尤其是促進土黨參離體增殖的套盒和方法。

背景技術

目前土黨參離體快速繁殖的研究較少。王祝年等(2007)以成熟果實為外植體，取種子進行無菌萌發獲得幼苗，將幼苗切為莖段，采用MS+6-BA 1.0mg·L^-1+NAA 0.1mg·L^-1，以20天為周期進行繁殖，繁殖率為5-6倍，之后在生根培養基MS+NAA 0.5mg·L^-1上進行生根，生根率為100％，移栽后獲得了完整植株。我們采用相同的方法進行種子無菌萌發獲得幼苗，將幼苗切為莖段，采用MS+6-BA 1.0mg·L^-1+NAA 0.1mg·L^-1進行繁殖時，接種的莖段側芽萌發，但不繼續伸長，逐漸黃化死亡，未能重現文獻的結果，表明現有的土黨參離體快速繁殖方法并不可靠。

發明內容

基于此，本發明的目的在于克服上述現有技術的不足之處而提供一種能實現土黨參離體快速繁殖的套盒和方法，以提高土黨參的繁殖率。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案為：促進土黨參離體快速增殖的套盒，所述套盒包含用以誘導出帶不定芽塊的莖段的培養基1和用以反復繼代培養培養基2，所述培養基1和培養基2均包含以下組分：6-芐基氨基嘌呤、噻苯隆和MS培養液。由此，本發明首次加入噻苯隆(TDZ)配合6-芐基氨基嘌呤(BA)誘導帶不定芽塊的莖段，解決了僅采用BA和NAA進行初次繼代時存在的繁殖率低、植株黃化不能持續繼代繁殖的問題；利用本發明的套盒可以促進土黨參莖段反復繼代至少5次，經壯苗、生根、移栽后獲得數量可觀的無菌土黨參苗。

優選地，所述培養基1中，6-芐基氨基嘌呤的濃度為0.4～0.6mg/L，噻苯隆的濃度為0.01～0.1mg/L；所述培養基2中，6-芐基氨基嘌呤的濃度為0.4～0.6mg/L，噻苯隆濃度為0.01～0.02mg/L。應當說明的是，培養基2中采用TDZ和BA的配合在莖段基部誘導出的不定芽塊，在培養基3中繼代，此類帶不定芽塊的莖段可在較低濃度的TDZ和BA中繼代培養5次以上；以30天為培養周期，繁殖倍數為10～15倍，植株基部叢生，高度約為4～6cm。

優選地，所述培養基1和培養基2分別還包括以下組分：25～35g/L的蔗糖以及6.5～7.5g/L的瓊脂。由此，培養基1包括以下組分：MS培養液、0.4～0.6mg/L的6-芐基氨基嘌呤、0.01～0.1mg/L的噻苯隆、25～35g/L的蔗糖以及6.5～7.5g/L的瓊脂；培養基2包括以下組分：MS培養液、0.4～0.6mg/L的6-芐基氨基嘌呤、0.01～0.02mg/L的噻苯隆、25～35g/L的蔗糖以及6.5～7.5g/L的瓊脂。

優選地，所述套盒還包含用以繼代和壯苗的培養基3，所述培養基3包含以下組分：MS培養液、0.5～1.0mg/L的6-芐基氨基嘌呤、0.05～0.1mg/L的萘乙酸、25～35g/L的蔗糖以及6.5～7.5g/L的瓊脂；由此，在壯苗階段，采用此配方的培養基3可使不定芽塊消失，葉色深綠、生長健壯、葉柄處帶有芽點，符合生根和成苗要求。

優選地，所述套盒還包含用于生根的培養基4和作為前處理液的100～300mg/L的吲哚丁酸；所述培養基4包含以下組分：MS培養液、25～35g/L的蔗糖以及6.5～7.5g/L的瓊脂。由此，本套盒采用此配方，可使莖段生根迅速、側根多，根系質量好。