[發明專利]快速鑒定屏邊三七及西洋參等人參屬中藥的SNP標記、試劑盒及方法

有效

• 申請號: 201611218427.4
• 申請日: 2016-12-26
• 公開（公告）號: CN106591459B
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發明（設計）人: 黃林芳;李琳;陳士林
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院藥用植物研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

本發明涉及一種用于快速鑒定屏邊三七及其混偽品的SNP標記，所述SNP標記的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；該序列的5’端起第88位為A和/或第117位為C。本發明還涉及一種用于快速鑒定屏邊三七及其混偽品的試劑盒，包含用于擴增得到SEQ ID NO.1所示序列的引物。本發明進一步涉及一種快速鑒定屏邊三七及其混偽品的方法，該方法以待鑒定樣品的基因組DNA為模板，擴增SEQ ID NO.1所示序列，檢測所得擴增片段中5’端起第88位堿基和第117位堿基，從而判斷待鑒定樣品為屏邊三七或其混偽品。本發明提供的方法可以準確的將屏邊三七與形態特征相似的混偽品區分開，該方法適應性廣，能檢測所有能提取出DNA的屏邊三七任何樣品，能夠實現屏邊三七的快速、準確鑒定。

技術領域

本發明涉及中藥材來源品種鑒定技術領域，具體涉及用一種特異性的快速鑒定屏邊三七及其混偽品的SNP標記、試劑盒及方法。

背景技術

屏邊三七是五加科植物屏邊三七Panax stipuleanatus H.T.Tsai et K.M.Feng的干燥根。根莖富含皂甙，主要用于治療肝腎不足所致腰膝酸軟無力、肢體麻木、筋骨拘攣等癥。屏邊三七又名野三七、香刺、土三七、竹節七、白三七，與人參屬三七、人參、西洋參、竹節參、珠子參、姜狀三七、羽葉三七、狹葉竹節參等性狀相似，但與這些人參屬植物化學成分有一定差異，功效不同，價格相差甚大。屏邊三七經常在市場上被當做人參、西洋參、三七、竹節參、姜狀三七等人參屬藥材使用。傳統的形態學鑒定很難將其區分開來，尤其對于藥材粉末、飲片、中成藥等鑒定有很大困難。

單核苷酸多態性(Single Nucleotide Polymorphism，SNP)是一種穩定、快速的物種鑒定方法，較RAPD、SCAR、PCR-RFLP等方法操作簡便，對實驗人員要求低。現有的關于人參屬的SNP分子鑒定中未涉及屏邊三七，本發明為首次運用SNP方法鑒定屏邊三七。

發明內容

本發明第一個目的在于提供一種快速鑒定屏邊三七及其混偽品的SNP標記。本發明提供的屏邊三七鑒定用SNP標記，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。其中，SEQ ID No.1所示序列中只存在兩個SNP。SEQ ID NO.1序列5’端起第88位屏邊三七為A，其混偽品為G；第117位屏邊三七為C，其混偽品為A。

本發明提供的SNP可用于快速鑒定屏邊三七及其混偽品。具體而言，如果待鑒定樣品SEQ ID NO.1序列的5’端起第88位為A，和/或第117位為C，則鑒定為屏邊三七；如果待鑒定樣品SEQ ID NO.1序列的5’端起第88位不為A且第117位不為C，則鑒定為屏邊三七的混偽品。

本發明第二個目的在于提供一種快速鑒定屏邊三七的試劑盒，所述試劑盒包含用于擴增得到SEQ ID NO.1所示序列的引物。

在實際應用時，所述快速鑒定屏邊三七的試劑盒中包含以下用于待鑒定樣品基因組DNA擴增的引物：

正向PsbA1F：5’-TGCCTTGATCCACTTGGCTACAT-3’；

反向TrnH1R：5’-TGTTCTATCAAGAGGGCGGTATT-3’。

本發明提供的試劑盒及引物特異性高，擴增效率高，能檢測所有能提取出DNA的屏邊三七任何樣品。

本發明提供的所述SNP標記或所述試劑盒均可應用于快速鑒定屏邊三七及其混偽品。

本發明所述屏邊三七具體為：屏邊三七的原植物、原料藥材、種子、粉末、飲片或中成藥。

本發明所述混偽品主要是人參屬中藥，優選包括人參屬三七、人參、西洋參、竹節參、珠子參、姜狀三七、羽葉三七和/或狹葉竹節參。

本發明第三個目的在于提供一種快速鑒定屏邊三七的方法，包括以下步驟：