[發明專利]一種純化制備高品質生物多糖的方法

有效

• 申請號: 201611215234.3
• 申請日: 2016-12-26
• 公開（公告）號: CN108239177B
• 公開（公告）日: 2021-06-29
• 發明（設計）人: 郭宏亮;林檬;莊秀園;王軒;葉榛
• 申請（專利權）人: 浙江立恩生物科技有限公司
• 主分類號: C08B37/02
• 分類號: C08B37/02;C12P19/04;C12R1/645
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 徐迅;肖艷

1.一種β-葡聚糖的制備方法，其特征在于，包括下述步驟：

（1）將裂褶菌發酵液與4倍體積的蒸餾水混合，60℃下浸煮8h；

（2）將浸煮液在4000rpm離心5min，取上清液；將上清液用300目的濾布負壓過濾，取濾出清液待用；

（3）將步驟（2）過濾后的浸煮液加熱至50℃，向其中同時加入200目的木質活性炭及8~16目的椰殼活性炭，每種活性炭的添加體積為浸煮液體積的1%；于50℃，350rpm條件下持續攪拌4h，冷卻后待用；將上述冷卻待用的混合有活性炭的浸煮清液，依次使用300目濾布及SCP-321#濾板進行負壓抽濾，取過濾后的清液待用；

（4）將步驟（3）過濾后的清液與95%濃度的食用乙醇混合，體積比為1：3，攪拌，直至β-葡聚糖析出；和

（5）將步驟（4）得到的析出物置于帶孔托盤中，使用電熱烘箱40℃烘干，直至恒重，得干燥的β-葡聚糖；

其中，所述裂褶菌發酵液通過如下步驟制備得到：

（a）裂褶菌菌種活化：將馬鈴薯200g/L、葡萄糖30g/L、氯化鈉10g/L、瓊脂20g/L制成平板培養基，把裂褶菌菌種接種到該平板培養基上，于25℃恒溫培養箱內培養7天得到平板菌絲體；

（b）種子活化：將馬鈴薯淀粉100g/L、葡萄糖40g/L、酵母浸膏2g/L、酵母浸粉2g/L、水制成的液體培養基裝入搖瓶，裝液量為1/3，取步驟（a）所得的平板菌絲體接種該搖瓶，于25℃恒溫搖床內160rpm震蕩培養培養7天，作為種子液；

（c）發酵培養：將葡萄糖50g/L、蔗糖50g/L、黃豆粉5g/L、酵母浸粉2g/L、磷酸二氫鉀0.5g/L、七水合硫酸鎂0.5g/L、硫酸銨0.5g/L、硝酸鉀6g/L、水制成的發酵培養基加入發酵罐中121℃滅菌15分鐘，再將步驟（b）所得的種子液接種上述發酵罐中，25℃恒溫300rpm攪拌4Lpm通氣發酵培養8天，從而制得所述裂褶菌發酵液。

2.一種β-葡聚糖的制備方法，其特征在于，包括下述步驟：

（1）將裂褶菌發酵液與1倍體積的蒸餾水混合，90℃下高溫浸煮0.5h；

（2）將步驟（1）得到的裂褶菌發酵浸煮液3000rpm離心60min，取上清液；上清液中加入2%硅藻土后，用300目的濾布負壓過濾，取濾出清液待用；

（3）在步驟（2）過濾后的浸煮液中，加入浸煮液體積的2%的200目木質活性炭，300rpm室溫攪拌5min，至攪拌均勻后，于4℃靜置16h；將上述含有活性炭的混合液，依次使用300目濾布及SCP-321#濾板進行負壓抽濾，取過濾后的清液待用；

（4）將步驟（3）過濾后的清液與95%濃度的食用乙醇混合，體積比為1：1，并攪拌，直至β-葡聚糖析出；向上述析出物中加入適量純水并補充至總體積達到醇析前清液的體積，持續攪拌直至醇析物充分溶解；將溶解后的β-葡聚糖溶液再次與95%濃度的食用乙醇混合，體積比為1：2，攪拌，直至β-葡聚糖析出；將β-葡聚糖析出物轉移至新的95%濃度的食用乙醇中，浸泡過夜，得到乙醇洗滌后的β-葡聚糖析出物；和

（5）將步驟（4）得到的析出物置于托盤中，置于電熱烘箱中40℃干燥，直至恒重，得β-葡聚糖干燥物；

其中，所述裂褶菌發酵液通過如下步驟制備得到：

（a）裂褶菌菌種活化：將馬鈴薯200g/L、葡萄糖30g/L、氯化鈉10g/L、瓊脂20g/L制成平板培養基，把裂褶菌菌種接種到該平板培養基上，于25℃恒溫培養箱內培養7天得到平板菌絲體；

（b）種子活化：將馬鈴薯淀粉100g/L、葡萄糖40g/L、酵母浸膏2g/L、酵母浸粉2g/L、水制成的液體培養基裝入搖瓶，裝液量為1/3，取步驟（a）所得的平板菌絲體接種該搖瓶，于25℃恒溫搖床內160rpm震蕩培養培養7天，作為種子液；

（c）發酵培養：將葡萄糖50g/L、蔗糖50g/L、黃豆粉5g/L、酵母浸粉2g/L、磷酸二氫鉀0.5g/L、七水合硫酸鎂0.5g/L、硫酸銨0.5g/L、硝酸鉀6g/L、水制成的發酵培養基加入發酵罐中121℃滅菌15分鐘，再將步驟（b）所得的種子液接種上述發酵罐中，25℃恒溫300rpm攪拌4Lpm通氣發酵培養8天，從而制得所述裂褶菌發酵液。