[發明專利]一種具有殼聚糖?RGD復合涂層的種植體活性表面

在審

• 申請號: 201611213409.7
• 申請日: 2016-12-23
• 公開（公告）號: CN106729994A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 郭斌;張久文;蔡俊江;彭鵬;李閃
• 申請（專利權）人: 大連三生科技發展有限公司
• 主分類號: A61L27/34
• 分類號: A61L27/34;A61L27/30;A61L27/54;A61L27/58
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司21212
• 代理人: 趙淑梅

技術領域

本發明屬于牙種植體技術領域，具體涉及具有殼聚糖-RGD復合涂層的種植體活性表面。

背景技術

隨著牙種植體技術的不斷發展，和被醫患者廣泛的認可，也是近年口腔醫學里發展最快的一個專業，不斷取得突破性進展，正在為更多的牙疾患者提供專業幫助。然而，不得不承認的另一現狀是，現有的介入裝置植入體內后很容易發生感染。主要的感染機制是進入體內的細菌首先粘附在材料表面，由于體內豐富的營養環境，細菌發生繁殖，形成了一層保護性的生物膜。生物膜的存在使得醫用裝置引發的感染尤為難治。

Roos.Jansaker等對種植術后患者進行多年的隨訪，以存在探診出血同時未出現骨質喪失為診斷標準進行臨床病例統計，結果顯示，種植體周黏膜炎的發病率約為79％；甚至有研究表明，約有超過90％的種植體出現過探診出血。而種植體周圍炎可導致種植體周骨組織的缺損、喪失，如不及時治療可導致種植體的松動脫落。

由于牙種植體表面的主要成分通常處理為帶負電狀態。并將含有電正性基團的聚合物如殼聚糖與牙種植體表面有較好的黏附作用。另外含有與羥基互為氫鍵給體/受體的基團的聚合物，如海藻酸鈉、羥丙基纖維素等也可能與牙種植體表面有一定的黏附作用。

生物活性肽是蛋白質中20個天然氨基酸以不同組成和排列方式構成的從二肽到復雜的線性、環形結構的不同肽類的總稱，是源于蛋白質的多功能化合物。活性肽具有多種人體代謝和生理調節功能，易消化吸收，有促進免疫、激素調節、抗菌、抗病毒、降血壓、降血脂等作用。

RGD序列由精氨酸、甘氨酸和天冬氨酸組成，存在于多種細胞外基質中，可與11種整合素特異性結合，能有效地促進細胞對生物材料的粘附。將RGD序列固定于鈦或鈦合金種植體表面，可以促進成骨細胞對鈦或鈦合金表面的粘附，進一步促進種植體骨整合，提高種植義齒的成功率。RGD序列的空間結構、修飾密度、周圍序列對其活性都有一定影響。

總之，牙種植體對材料的表面性質要求非常高。因此，探索新型的牙種植體表面改性方法逐漸成為了種植領域的科研方向。

發明內容

為解決上述技術問題所采用的技術方案是：公開具有殼聚糖-RGD復合涂層的種植體活性表面，所述牙種植體表面順次涂覆有二氧化鈦層、正電荷殼聚糖層與負電荷RGD肽層或AMP復合物層交替組裝的緩釋層，外層負載硫酸軟骨素層-抗菌肽層。

對于上述技術方案，優選的情況下，所述的抗菌肽層的制備方法包括以下操作步驟：

(1)先秤取100mg RGD肽加至10ml的濃度為1％的醋酸-醋酸鈉緩沖液中；緩慢攪拌至溶解后，加入EDC·HCl 500mg，再加入NHS 250mg，經過磁力攪拌器活化12h；放入ddH₂O中透析，在磁力攪拌器攪拌狀態下隔夜；獲得RGD肽溶液；

(2)將種植體表面打磨，清洗，烘干；用50～100μmTiO₂微粒對種植體表面進行噴砂處理；再置于氫氟酸與鹽酸組成的混合酸蝕劑中進行表面刻蝕處理，取出種植體超聲清洗，干燥；再將種植體置于60℃、5mol/L NaOH溶液孵育24-48h，用水超聲清洗備用；

(3)將步驟(2)所述的牙種植體浸沒于0.5～5mg/ml的殼聚糖溶液中10～20min，以使牙種植體表面帶上正電荷；再用去離子水充分清洗；

(4)將步驟(3)所述的牙種植體浸沒于步驟(1)所述的RGD肽溶液中3h以上；或浸沒于濃度為lmg/ml的AMP復合物溶液中5～10min，以使牙種植體表面帶上負電荷；再用去離子水充分清洗；

根據需要組裝的層數，重復步驟(3)、(4)和(3)即可得到帶有不同層數涂層的牙種植體；

(5)將步驟(4)所述的牙種植體在濃度為2mg/mL的硫酸軟骨素硫酸鈉鹽溶液中浸泡5～15min，溶液體系控制pH值為6，再用去離子水充分清洗后自然干燥；再將涂覆有硫酸軟骨素的牙種植體浸泡于pH值為7，濃度為0.5mg/mL的抗菌肽溶液中5～15min，再用去離子水充分清洗后自然干燥，獲得涂覆有硫酸軟骨素層-抗菌肽層復合層的材料。

上述技術方案中，所述RGD是Arg-Gly-Asp的短肽序列，由精氨酸、甘氨酸和天冬氨酸組成；

所述EDC·HCl為1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽，英文名稱：1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride；

所述NHS為N-羥基琥珀酰亞胺，英文名稱:N-Hydroxysuccinimide；