[發明專利]一種姬玉露的離體快速繁殖方法

有效

• 申請號: 201611209940.7
• 申請日: 2016-12-24
• 公開（公告）號: CN106577294B
• 公開（公告）日: 2018-08-24
• 發明（設計）人: 董誠明;蘇秀紅;王琳琳;魏碩;熊玉平
• 申請（專利權）人: 河南中醫藥大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 鄭州天陽專利事務所(普通合伙) 41113
• 代理人: 蔡文雅

1.一種姬玉露的離體快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）外植體表面滅菌：以姬玉露的葉片為外植體，將0.05-0.1g肥皂，溶解到150-200ml的自來水中制作成肥皂水，然后把姬玉露的葉片在肥皂水中浸泡15min，至流水下沖洗2h，將沖洗干凈的姬玉露的葉片在無菌操作臺上，用體積濃度為75%的酒精表面消毒30s，再用質量濃度為0.1% 的HgCL₂表面消毒7min，最后用無菌水沖洗5-7次；

2）愈傷組織的誘導：將經過表面滅菌的葉片外植體在無菌操作臺上切成0.3cm²-0.6cm²的小塊，放入經過高壓滅菌的培養基中，每瓶培養基為50ml，每瓶放入5塊外植體，培養室內溫度23-27℃、光照強度1500～2000lx、光照時間12 h/d下進行培養，培養30d后統計愈傷組織的誘導率；所述的培養基是由：每1000ml的1/2MS培養基中加入6-BA 1-3 mg和NAA0.2-2mg制成；

3）芽的誘導：將誘導出的愈傷組織，轉入每1000ml的MS培養基中加入6-BA 0.3-3mg和NAA 0.1-1mg制成的培養基中誘導分化，每瓶培養基裝量為50ml，每瓶放入5塊愈傷組織，培養室內溫度23-27℃、光照強度1500～2000lx、光照時間12h/d 下進行芽的誘導；30d后統計不定芽的誘導率；

4）芽增殖：將具不定芽的愈傷組織切割成若干塊，每塊具2-3個不定芽，轉入每1000ml的MS培養基中加入6-BA 0.5-1mg和NAA 0.05-0.2mg制成的增殖培養基中，每瓶增殖培養基裝量為50ml，每瓶放入5塊，培養室內溫度23-27℃、光照強度1500～2000lx、光照時間12 h/d 下進行培養，30d后統計不定芽的增殖倍數；

5）生根：增殖后的芽培養一段時間，長成1-2cm高時，切割成單芽，轉入每1000ml的1/2MS培養基中加入6-BA 0.005-0.01 mg和NAA0.05- 0.2mg制成的生根培養基中，每瓶生根培養基裝量為50ml，每瓶放入5個芽，培養室內溫度23-27℃、光照強度1500～2000lx，光照時間12 h/d，6-7d即可成較粗壯的根，15d后統計其生根率；

6）馴化移栽：幼苗長到2-3cm高時，打開瓶蓋煉苗4～5d后取出，洗凈根部瓊脂后，栽入不同基質，覆蓋塑料薄膜保濕，待其長出新根，移到苗床上即可。