[發(fā)明專利]用于分析大豆鐮孢根腐真菌多樣性的特異性引物組、試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611207629.9
• 申請日: 2016-12-23
• 公開（公告）號: CN106755416B
• 公開（公告）日: 2018-10-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 常小麗;楊文鈺;付瑤;何宛芹;楊繼芝;武曉玲;雍太文;尚靜
• 申請（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/77
• 代理公司: 北京元本知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 11308
• 代理人: 秦力軍

1.用于分析大豆鐮孢根腐真菌多樣性的特異性引物組，其特征在于，其由：

如SEQ ID NO.1所示的第一正向引物；

如SEQ ID NO.2所示的第二正向引物；

如SEQ ID NO.3所示的第三正向引物；

如SEQ ID NO.4所示的第四正向引物中的一種或多種，以及

如SEQ ID NO.5所示的共用反向引物組成。

2.一種檢測大豆鐮孢根腐真菌的試劑盒，其特征在于，其具有權(quán)利要求1所述特異性引物組，其中，所述特異性引物組由：

如SEQ ID NO.1所示的第一正向引物；

如SEQ ID NO.2所示的第二正向引物；

如SEQ ID NO.3所示的第三正向引物；

如SEQ ID NO.4所示的第四正向引物中的一種或多種，以及

如SEQ ID NO.5所示的共用反向引物組成。

3.如權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，使用其進(jìn)行PCR的條件為：94℃預(yù)變性3min；94℃變性30s，52～56℃退火30s，72℃延伸30s，循環(huán)25～40次；72℃終延伸5min。

4.如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，利用其擴(kuò)增出的條帶、條帶數(shù)量和條帶大小就可以判斷大豆鐮孢根腐真菌的數(shù)量和種類。

5.一種檢測大豆根腐病的方法，其特征在于，使用權(quán)利要求1所述的特異性引物組對待測樣本的DNA進(jìn)行多重PCR檢測，若瓊脂凝膠電泳出現(xiàn)條帶，則判斷待測樣本發(fā)生了該鐮孢菌引起的根腐病。

6.如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述使用權(quán)利要求1所述的特異性引物組對待測樣本的DNA進(jìn)行多重PCR檢測的反應(yīng)體系為：體系總量10～50μL，包括待測樣本的DNA溶液2.0～4.0μL、正向引物1.5～4.0μL、反向引物1.5～4.0μL、Tap Master Mix聚合酶混合液5.0～25.0μL、超純水0～13.0μL。

7.如權(quán)利要求6所述方法，其特征在于，所述使用權(quán)利要求1所述的特異性引物組對待測樣本的DNA進(jìn)行多重PCR檢測的反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性3min；94℃變性30s，52～56℃退火30s，72℃延伸3s，循環(huán)25～40次；72℃終延伸5min。

8.一種檢測大豆根腐病的方法，其特征在于，使用權(quán)利要求2所述的試劑盒對待測樣本的DNA進(jìn)行檢測，若瓊脂凝膠電泳出現(xiàn)條帶，則判斷待測樣本發(fā)生了大豆鏈孢根腐病，并根據(jù)條帶的大小和數(shù)量，判斷病原菌的數(shù)量與種類，從而有針對性的防治大豆根腐病。

9.如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，所述使用權(quán)利要求2所述的試劑盒對待測樣本的DNA進(jìn)行檢測的反應(yīng)體系為：體系總量10～50μL，包括待測樣本的DNA溶液2.0～4.0μL、正向引物1.5～4.0μL、反向引物1.5～4.0μL、Tap Master Mix聚合酶混合液5.0～25.0μL、超純水0～13.0μL。

10.如權(quán)利要求9所述方法，其特征在于，所述使用權(quán)利要求2所述的試劑盒對待測樣本的DNA進(jìn)行檢測的反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性3min；94℃變性30s，52～56℃退火30s，72℃延伸3s，循環(huán)25～40次；72℃終延伸5min。