[發明專利]一種雙膦酸類藥物的檢測方法

在審

• 申請號: 201611207400.5
• 申請日: 2016-12-23
• 公開（公告）號: CN108241026A
• 公開（公告）日: 2018-07-03
• 發明（設計）人: 羅茜;楊致一;劉春花;李芳
• 申請（專利權）人: 中國科學院深圳先進技術研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;熊永強

本發明提供了一種雙膦酸類藥物的檢測方法，包括：對含雙膦酸類藥物的待測樣品進行預處理，得到預處理后的樣品溶液；采用液相色譜?串聯質譜法對所述樣品溶液進行檢測，得到待測樣品中雙膦酸類藥物的含量，其中，所述液相色譜?串聯質譜法的色譜條件包括：采用五氟苯基柱作為色譜柱，流動相由A相和B相組成，A相為甲酸和甲酸銨的混合水溶液，B相為甲醇。本發明中針對極性強、多級電離、無生色團的雙膦酸類藥物，運用基于五氟苯基柱的液相色譜?串聯質譜法進行檢測，可避免對待測樣品的衍生化處理，也可避免在流動相中加入價格昂貴的離子對試劑，能夠實現對雙膦酸類藥物高效、準確的定性、定量檢測，解決了雙膦酸類藥物檢測困難的問題。

技術領域

本發明涉及生化分析技術領域，具體涉及一種雙膦酸類藥物的檢測方法。

背景技術

雙膦酸鹽類藥物是一種高效骨吸收抑制劑，臨床上用于骨骼上各種相關疾病(如骨質疏松癥、變形性骨炎及惡性高鈣血等)的治療。根據其化學組成，雙膦酸類藥物可分為含氮類與不含氮類雙膦酸類藥物。常見的含氮類雙膦酸類藥物包括帕米膦酸鈉(pamidronate)、阿侖膦酸鈉(alendronate)、利賽膦酸鈉(risedronate)和唑來膦酸(zoledronate)等。通過對雙膦酸類藥物(尤其是生物樣品中)的分析可為藥代動力學研究、治療藥物檢測及用藥安全性和有效性的研究提供有效的評估手段。

雙膦酸類藥物所具有的特殊結構使其分析存在如下困難:(1)由于其極性大，易電離，在非極性的液相色譜柱上保留困難；需要在流動相中添加離子對試劑來提高其在色譜柱上的保留；(2)可用離子交換色譜進行檢測，但是由于該類藥物存在著多級電離，流動相必須選擇強酸或強堿性物質，而固定相又必須為耐強酸強堿的陰離子交換柱，從而保證它們能單一的電離形式，其價格十分昂貴，靈敏度和選擇性也較差；(3)由于其難揮發性，不能用氣相色譜直接分析，需要進行衍生化轉變成揮發性衍生物再進行分析；(4)大多數雙膦酸類藥物沒有可檢測的生色團，只能通過衍生手段，對其骨架結構進行修飾，從而改變其理化性質，使其能夠被常規的紫外或熒光檢測器所檢測到。因此，建立一種高效、快捷的檢測方法，將有利于雙膦酸類的深入研究，也為其進一步的體內研究奠定堅實的基礎。

發明內容

鑒于此，本發明提供了一種高效、快捷的檢測方法，可準確測定待測樣品中的雙膦酸類化合物含量，以解決現有技術中雙膦酸類藥物檢測困難的問題。

具體地，本發明提供了一種雙膦酸類藥物的檢測方法，包括以下步驟：

對含雙膦酸類藥物的待測樣品進行預處理，得到預處理后的樣品溶液；

采用液相色譜-串聯質譜法對所述樣品溶液進行檢測，得到待測樣品中雙膦酸類藥物的含量，其中，所述液相色譜-串聯質譜法的色譜條件包括：采用五氟苯基柱(PFP柱)作為色譜柱，流動相由A相和B相組成，A相為甲酸和甲酸銨的混合水溶液，B相為甲醇。

其中，所述A相中，甲酸的體積分數為0.1～0.5％，甲酸銨的濃度為5～20mM。

PFP柱的強芳香性環可以有效保留強極性的雙膦酸類藥物，便于在色譜上的分離。

其中，所述五氟苯基柱的柱內徑為1～3mm，柱長為50～150mm，填料粒徑為1～5μm。

其中，所述色譜柱的柱溫為20～40℃。

其中，所述流動相采用梯度洗脫，所述梯度洗脫的程序如下：0～0.5min，A相與B相的體積比為95/5；0.5～1.5min，A相與B相的體積比由95/5線性地變為50/50；1.5～2.5min，保持A相與B相的體積比為50/50；2.5～2.6min，A相與B相的體積比由50/50線性地變回95/5；之后將A相與B相的體積比為95/5保持5min。

其中，所述流動相的流速為0.2～0.4mL/min。

其中，所述液相色譜-串聯質譜法的色譜條件還包括：進樣量為5～20μL。