[發明專利]一種雙膦酸類藥物的檢測方法

在審

• 申請號: 201611207400.5
• 申請日: 2016-12-23
• 公開（公告）號: CN108241026A
• 公開（公告）日: 2018-07-03
• 發明（設計）人: 羅茜;楊致一;劉春花;李芳
• 申請（專利權）人: 中國科學院深圳先進技術研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/72
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 郝傳鑫;熊永強

1.一種雙膦酸類藥物的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

對含雙膦酸類藥物的待測樣品進行預處理，得到預處理后的樣品溶液；

采用液相色譜-串聯質譜法對所述樣品溶液進行檢測，得到待測樣品中雙膦酸類藥物的含量，其中，所述液相色譜-串聯質譜法的色譜條件包括：采用五氟苯基柱作為色譜柱，流動相由A相和B相組成，A相為甲酸和甲酸銨的混合水溶液，B相為甲醇。

2.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述A相中，甲酸的體積分數為0.1～0.5％，甲酸銨的濃度為5～20mM。

3.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述五氟苯基柱的柱內徑為1～3mm，柱長為50～150mm，填料粒徑為1～5μm。

4.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述流動相采用梯度洗脫，所述梯度洗脫的程序如下：0～0.5min，A相與B相的體積比為95/5；0.5～1.5min，A相與B相的體積比由95/5線性地變為50/50；1.5～2.5min，保持A相與B相的體積比為50/50；2.5～2.6min，A相與B相的體積比由50/50線性地變回95/5；之后以A相與B相的體積比為95/5保持5min。

5.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述流動相的流速為0.2～0.4mL/min。

6.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述液相色譜-串聯質譜法的色譜條件還包括：進樣量為5～20μL。

7.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述色譜柱的柱溫為20～40℃。

8.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述液相色譜-串聯質譜法的質譜條件包括：采用電噴霧離子源負離子模式，以多反應監測的掃描方式進行數據采集；離子源溫度為80～150℃，毛細管電壓為2.5～3.0kV，錐孔電壓為10～50V，脫溶劑氣溫度為320～450℃，脫溶劑氣流速為500～700L/h，錐孔氣流速為30～80L/h。

9.如權利要求8所述的檢測方法，其特征在于，所述液相色譜-串聯質譜法的質譜條件，還包括：碰撞能為5～40V，檢測的離子對為[M–H]^-→[M–H–H₃PO₃]^-。

10.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，當所述待測樣品為含雙膦酸類藥物的細胞培養液時，所述預處理包括：吸取所述細胞培養液中的上清液，并用超純水洗滌細胞，合并所述上清液和洗滌液，并經稀釋或濃縮、過濾后，得到所述預處理后的樣品溶液。

11.如權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，采用內標法對待測樣品中雙膦酸類藥物的含量進行定量檢測，其中，所述內標法的步驟包括：

首先配制含不同濃度雙膦酸類藥物標準品與相同濃度內標物的混合標準品工作溶液，以標準品與內標物的濃度比為橫坐標，以標準品與內標物的色譜峰面積比為縱坐標，建立標準曲線；

對加入有相同濃度內標物的待測樣品進行檢測，根據所述標準曲線計算待測樣品中雙膦酸類藥物的含量；其中，所述內標物為雙膦酸類藥物的同位素標記物，或者為待測樣品中所不含有的其他種類的雙膦酸類藥物。

12.如權利要求1-11任一項所述的檢測方法，其特征在于，所述雙膦酸類藥物包括帕米膦酸鈉、阿侖膦酸、利賽膦酸鈉和唑來膦酸中的一種或多種。