[發(fā)明專利]一種用于修飾微泡的多肽以及靶向GBM的藥物制劑

有效

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• 申請日: 2016-12-23
• 公開（公告）號: CN106632688B
• 公開（公告）日: 2020-06-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 任精華;何文山;葉之蘭;張濤;伍鋼;楊坤禹
• 申請（專利權(quán)）人: 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;A61K9/50;A61K47/46;A61K47/42;A61K31/519;A61P35/00
• 代理公司: 北京輕創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11212
• 代理人: 楊立;陳振玉

本發(fā)明涉及一種用于修飾微泡的多肽，其包括從N端到C端依次排列的親脂性結(jié)構(gòu)域、細(xì)胞殺傷結(jié)構(gòu)域和腫瘤靶向結(jié)構(gòu)域，所述腫瘤靶向結(jié)構(gòu)域為低密度脂蛋白模擬肽，所述親脂性結(jié)構(gòu)域與細(xì)胞殺傷結(jié)構(gòu)域之間以及所述細(xì)胞殺傷結(jié)構(gòu)域與腫瘤靶向結(jié)構(gòu)域之間，由柔性多肽連接。本發(fā)明還涉及使用上述多肽制備的靶向GBM的藥物制劑，還涉及使用上述微泡載劑制備的靶向GBM的藥物制劑。本發(fā)明的多肽、載劑和藥物制劑理化特性優(yōu)良、生物相容性好、制備工藝簡單、治療效果好、靶向性能好，可有效穿過血腦屏障，并且特異性地靶向GBM。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及抗腫瘤藥物制劑領(lǐng)域，更特別地，涉及一種修飾微泡的多肽，使用所述多肽制備的靶向GBM的微泡載劑和藥物制劑。

背景技術(shù)

多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(glioblastoma multiforme，GBM)是成人常見的高度惡性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤，具有病程短、進(jìn)展快、預(yù)后差等特點，中位生存期僅10-12個月。目前，針對GBM的治療存在很多困難，其原因是多方面的。首先，GBM呈浸潤性生長，與正常腦組織無明顯分界，導(dǎo)致手術(shù)難以徹底切除，術(shù)后復(fù)發(fā)率高；其次，由于血-腦屏障的存在，絕大部分化療藥物無法抵達(dá)病灶殺傷膠質(zhì)瘤細(xì)胞；此外，GBM位于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，而傳統(tǒng)化療藥物不具備組織選擇性，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時也會造成對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損害，副作用巨大。

為了克服血-腦屏障的問題，有人提出使用微泡(microvesicle，MV)來搭載抗腫瘤藥物。微泡是機(jī)體細(xì)胞在靜息和應(yīng)激狀態(tài)下分泌產(chǎn)生的直徑在100～1000nm之間的膜性囊泡，是一種新發(fā)現(xiàn)的作用關(guān)鍵卻長期被忽略的細(xì)胞間通訊方式。MV通過高效結(jié)合，將其內(nèi)容物(miRNA、cirRNA、蛋白質(zhì)或其他信號分子)橫向傳遞給受體細(xì)胞從而調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的表型和生物學(xué)功能。進(jìn)一步研究顯示，MV具有以下特點：1)可通過多種方式(孵育、電穿擊)包載各類藥物(化療藥物、siRNA、miRNA)以避免其到達(dá)病灶前降解；2)在血液中穩(wěn)定性好，MV裝載的藥物在體內(nèi)可保持一個較長的循環(huán)半衰期從而提高療效；3)生物相容性良好，無毒副作用；4)作為一種內(nèi)源性的生物成分，MV廣泛分布于生物體液和培養(yǎng)細(xì)胞上清中，來源廣泛，極易獲??；5)尤為重要的是，MV可穿過生物屏障，如血-腦屏障。因此，脂質(zhì)雙層結(jié)構(gòu)的微泡作為一種內(nèi)源性的細(xì)胞間物質(zhì)傳遞介質(zhì)，具備天然藥物載體的巨大潛力。然而，微泡不能特異性地靶向腫瘤組織，仍然避免不了對正常組織的傷害。

為拓展開發(fā)具有腫瘤靶向性的微泡藥物，有學(xué)者通過基因轉(zhuǎn)染母體細(xì)胞，使其分泌帶有特定腫瘤靶向的MV載藥系統(tǒng)，但該方法面臨轉(zhuǎn)染效率低，靶向MV獲得不可控，耗時費力等弊端，僅停留在研究層面，如何實現(xiàn)高效、簡便、易操作和可控性好的MV靶向修飾成為該領(lǐng)域亟待解決的難題。

發(fā)明內(nèi)容

為解決以上問題，本發(fā)明提供了一種用于修飾微泡的多肽，其包括從N端到C端依次排列的親脂性結(jié)構(gòu)域、細(xì)胞殺傷結(jié)構(gòu)域和腫瘤靶向結(jié)構(gòu)域，所述腫瘤靶向結(jié)構(gòu)域為低密度脂蛋白模擬肽，所述親脂性結(jié)構(gòu)域與細(xì)胞殺傷結(jié)構(gòu)域之間以及所述細(xì)胞殺傷結(jié)構(gòu)域與腫瘤靶向結(jié)構(gòu)域之間，由柔性連接肽連接。

優(yōu)選地，所述低密度脂蛋白模擬肽的序列如SEQ ID NO:1所示。

優(yōu)選地，所述親脂性結(jié)構(gòu)域的序列如SEQ ID NO:2所示，并且該序列的N端天冬氨酸殘基被乙酰化。

優(yōu)選地，所述細(xì)胞殺傷結(jié)構(gòu)域的序列如SEQ ID NO:3所示,并且該序列中的所有氨基酸殘基均為D型。

優(yōu)選地，其特征在于，所述柔性連接肽由兩個相連的甘氨酸殘基組成。

本發(fā)明還提供了一種靶向GBM的微泡載劑，其由上述多肽修飾微泡得到。

本發(fā)明還提供了一種靶向GBM的藥物制劑，其由上述微泡載劑搭載抗GBM藥物得到。

優(yōu)選地，所述抗GBM藥物為甲氨蝶呤。

本發(fā)明還提供了一種制備上述靶向GBM的藥物制劑的方法，其包括以下步驟：