[發明專利]一種高粱體細胞懸浮培養方法及應用

有效

• 申請號: 201611204000.9
• 申請日: 2016-12-23
• 公開（公告）號: CN106613978B
• 公開（公告）日: 2018-08-17
• 發明（設計）人: 郝艷芳;張微;劉勇;王良群;馬涌;楊偉;白鴻雁;武擘;侯麗萍;張曉娟
• 申請（專利權）人: 山西省農業科學院高粱研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 潘宏偉

1.一種高粱體細胞懸浮培養方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

步驟1，高粱種子的處理：

高粱種子先用70％乙醇浸泡1-3min，再用無菌水沖洗，然后用0.1g/100mL的HgCl₂水溶液浸泡10-20min，HgCl₂水溶液浸泡過程中加入2滴吐溫-20，最后無菌水沖洗，得到無菌高粱種子；

步驟2，制備高粱愈傷組織，具體包括：

將無菌高粱種子接種于無菌苗培養基中，于25±1℃培養，每天光照12h；培養到高粱無菌苗苗長為3-5cm時取出，將距離葉基1.0cm以上的葉片切成寬度為1mm的葉段，并將葉段接種于誘導培養基中，在25±1℃下培養愈傷，自然光照，20-30天后挑選狀態良好的愈傷組織進行繼代培養，繼代培養溫度為25±1℃，自然光照，直至得到高粱顆粒狀愈傷組織；

所述無菌苗培養基為：每升MS培養基中添加30g的蔗糖和8g的瓊脂，pH為5.8；

所述繼代培養的培養基與誘導培養基相同，均為：每升MS培養基中添加1mg的2,4-D、30g的蔗糖和8g的瓊脂，pH為5.8；

步驟3，高粱體細胞懸浮系的建立：

選取步驟2中疏松、干燥、易碎、生長旺盛、顆粒狀的高粱愈傷組織接種于液體培養基中，接種比例為2-3g:100mL，于100r/min、25±1℃、自然光下培養，每隔7天繼代一次；每次繼代時，將新、舊液體培養基以體積比為2：1的比例混合后作為繼代培養的培養基，總共培養42-45天后獲得高粱體細胞懸浮系；

所述液體培養基為：每升MS培養基中添加1mg的2,4-D和30g的蔗糖，pH為5.8。

2.根據權利要求1所述的高粱體細胞懸浮培養方法，其特征在于，步驟1中，高粱種子先用70％乙醇浸泡1min后，再用無菌水沖洗2-3次；HgCl₂水溶液浸泡15min后，用無菌水沖洗5-6次。

3.根據權利要求1所述的高粱體細胞懸浮培養方法，其特征在于，步驟2中，所述繼代培養的次數為2-3次，每次間隔18-25天。

4.根據權利要求1所述的高粱體細胞懸浮培養方法，其特征在于，步驟3中，接種比例為2.5g:100mL。

5.一種如權利要求1所述的高粱體細胞懸浮培養方法在高粱育種中的應用。