[發明專利]一種美洲大蠊過敏原蛋白BA2及其表達方法

有效

• 申請號: 201611201987.9
• 申請日: 2016-12-22
• 公開（公告）號: CN107759677B
• 公開（公告）日: 2021-04-20
• 發明（設計）人: 耿福能;岳碧松;沈詠梅
• 申請（專利權）人: 四川好醫生攀西藥業有限責任公司
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/70;C12N15/12;C07K1/22
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種重組美洲大蠊過敏原蛋白BA2，其特征在于，所述重組美洲大蠊過敏原蛋白BA2的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。

2.一種氨基酸序列如SEQ ID No.2所示美洲大蠊過敏原蛋白BA2。

3.一種重組美洲大蠊過敏原蛋白BA2的表達方法，其特征在于，所述表達方法包括以下步驟：

a.從美洲大蠊組織中提取總RNA，反轉錄成cDNA；

b.以所述cDNA 為模板通過PCR儀擴增得到的BA2目的基因，所述BA2目的基因的序列為SEQ ID No.3；

c.根據所述BA2目的基因的序列和原核表達載體pET-28a (+)的圖譜，合成帶Nhe I和Xho I酶切位點的引物，所述引物的序列如下：

BA2-F 5’-CGGCTAGCATGACGATTGACTTCTACTACTT-3’

BA2-R 5’- CCGCTCGAGTCATTTTTTTGTTTTGGACTCG-3’

將所述BA2目的基因與所述原核表達載體pET-28a (+)分別用Nhe I和Xho I酶切得到BA2目的基因片段和pET28a(+)的酶切產物，接著將所述BA2目的基因片段與所述pET28a(+)的酶切產物連接得到重組表達質粒；

d.將步驟c獲得的所述重組質粒轉入宿主菌，誘導其表達并純化蛋白。

4.根據權利要求3所述的一種重組美洲大蠊過敏原蛋白BA2的表達方法，其特征在于，所述表達方法中選用的宿主菌為大腸桿菌BL21。

5.根據權利要求3所述的一種重組美洲大蠊過敏原蛋白BA2的表達方法，其特征在于，所述表達方法中采用IPTG誘導表達，其中IPTG的終濃度為0.2mmol/L，誘導溫度為37℃，誘導時間5~6h。

6.根據權利要求3所述的一種重組美洲大蠊過敏原蛋白BA2的表達方法，其特征在于，所述表達方法中選用親和層析方法純化重組蛋白BA2，其中緩沖液包含磷酸鈉和咪唑。

7.根據權利要求1所述的一種重組美洲大蠊過敏原蛋白BA2在制備預防哮喘疫苗中的應用。