[發明專利]一種用于檢測膠類中藥及其復方制劑中狗骨源成分含量的組合物、試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201611199228.3
• 申請日: 2016-12-22
• 公開（公告）號: CN106645479B
• 公開（公告）日: 2019-08-09
• 發明（設計）人: 周祥山;郝向慧;郭尚偉;段小波;徐云鵬;王靜;王玉嬌;石永堅;龐慧慧;張大偉
• 申請（專利權）人: 東阿阿膠股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨

本發明公開了一種用于檢測膠類中藥及其復方制劑中狗骨源成分含量的組合物、試劑盒及其檢測方法，所述組合物由多肽以及對照品檢測基質組成，所述多肽的氨基酸序列為Gln?Gly?Pro?Ser?Gly?Thr?Ser?Gly?Glu?Arg，對照品檢測基質為魚骨膠。本發明的多肽為狗骨所特有，通過檢測該多肽來判斷是否含有狗源性成分，通過加入對照品檢測基質來實現狗源性成分含量的精確檢測。該方法具有含量檢測準確、操作快捷的優點，在膠類中藥及其復方制劑產品質量監控領域將具有廣泛的應用前景。

技術領域

本發明涉及一種用于檢測膠類中藥及其復方制劑中狗骨源成分含量的組合物、試劑盒及其檢測方法。本發明屬于醫藥檢測技術領域。

背景技術

狗骨為為犬科動物狗的骨骼，具有健脾和絡、活血生肌的功效，主治風濕痹痛、腰腿無力、四肢麻木、久痢、瘡瘺。以狗骨為主藥制成的制劑有狗骨膠、狗骨膠藥酒、復方狗骨膠、壯骨伸筋膠囊、駁骨丸等。目前狗骨的鑒別主要為性狀鑒別和顯微鑒別，因專屬性不強，常存在鑒別不準確等情況，對于用狗骨加工后的產品無法鑒別，更無法定量檢測。因為缺乏專屬性鑒別方法和定量方法，部分不法廠家進行造假或摻假，以降低成本獲得非法利潤。

因此，目前迫切需要提出一種能夠快速、準確檢測膠類中藥及其復方制劑中狗骨源成分含量的方法，進而實現對含狗骨源成分的產品的真偽鑒定。本發明從狗骨中主要成分出發，利用所含蛋白的氨基酸序列不同，找出狗骨特征性肽段，利用狗骨的特征肽段實現膠類中藥及其復方制劑中狗骨源性成分含量的檢測。

發明內容

本發明的一個目的在于，提供一種能夠快速、準確鑒定膠類中藥及其復方制劑中狗骨源成分含量的組合物。

本發明的另一個目的在于，提供一種能夠快速、準確鑒定膠類中藥及其復方制劑中狗骨源成分含量的試劑盒。

本發明的再一個目的在于，提供一種能夠快速、準確鑒定膠類中藥及其復方制劑中狗骨源成分含量的方法。

為了實現上述目的，本發明采用了如下技術方案：

一種用于檢測膠類中藥及其復方制劑中狗骨源成分含量的組合物，所述組合物由多肽及對照品檢測基質組成，所述多肽的氨基酸序列為Gln-Gly-Pro-Ser-Gly-Thr-Ser-Gly-Glu-Arg(SEQIDNO.1所示)，對照品檢測基質為魚骨膠。

含有所述組合物的檢測試劑盒也在本發明的保護范圍之內。

本發明進一步提供了一種用于檢測膠類中藥及其復方制劑中狗骨源成分含量的方法，具體包括如下步驟：

(1)對照品溶液的制備

1)基質溶液的制備：將稱量好的對照品檢測基質置于量瓶中，加入NH₄HCO₃溶液，超聲使樣品完全溶解，加NH₄HCO₃溶液稀釋至刻度；

2)對照品母液的制備：將稱量好的對照品檢測基質置于量瓶中，加入NH₄HCO₃溶液，超聲使樣品完全溶解，將稱量好的的多肽放入該量瓶中，用NH₄HCO₃溶液溶解并稀釋至刻度；

3)對照品溶液制備：以步驟1)制得的基質溶液為溶劑，將步驟2)制得的對照品母液稀釋，微孔濾膜過濾，續濾液中加胰蛋白酶溶液，酶解；

(2)待檢測樣品溶液的制備

將稱量好的待測膠類中藥置于量瓶中，加NH₄HCO₃溶液，超聲使膠類中藥完全溶解，加NH₄HCO₃溶液稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜過濾，續濾液中加胰蛋白酶溶液，酶解；

(3)液質聯用儀檢測