[發(fā)明專利]一種用于檢測(cè)膠類中藥及其復(fù)方制劑中狗骨源成分含量的組合物、試劑盒及其檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611199228.3
• 申請(qǐng)日: 2016-12-22
• 公開（公告）號(hào): CN106645479B
• 公開（公告）日: 2019-08-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周祥山;郝向慧;郭尚偉;段小波;徐云鵬;王靜;王玉嬌;石永堅(jiān);龐慧慧;張大偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東阿阿膠股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 北京科龍寰宇知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11139
• 代理人: 孫皓晨

1.一種用于檢測(cè)膠類中藥及其復(fù)方制劑中狗骨源成分含量的組合物，所述組合物由多肽及對(duì)照品檢測(cè)基質(zhì)組成，其特征在于：所述多肽的氨基酸序列為Gln-Gly-Pro-Ser-Gly-Thr-Ser-Gly-Glu-Arg，對(duì)照品檢測(cè)基質(zhì)為魚骨膠。

2.一種含有權(quán)利要求1所述組合物的檢測(cè)試劑盒。

3.一種用于檢測(cè)膠類中藥及其復(fù)方制劑中狗骨源成分含量的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)對(duì)照品溶液的制備

1)基質(zhì)溶液的制備：將稱量好的對(duì)照品檢測(cè)基質(zhì)置于量瓶中，加入NH₄HCO₃溶液，超聲使樣品完全溶解，加NH₄HCO₃溶液稀釋至刻度；

2)對(duì)照品母液的制備：將稱量好的對(duì)照品檢測(cè)基質(zhì)置于量瓶中，加入NH₄HCO₃溶液，超聲使樣品完全溶解，將稱量好的多肽放入該量瓶中，用NH₄HCO₃溶液溶解并稀釋至刻度；

3)對(duì)照品溶液制備：以步驟1)制得的基質(zhì)溶液為溶劑，將步驟2)制得的對(duì)照品母液稀釋，微孔濾膜過濾，續(xù)濾液中加胰蛋白酶溶液，酶解；

(2)待檢測(cè)樣品溶液的制備

將稱量好的待測(cè)膠類中藥置于量瓶中，加NH₄HCO₃溶液，超聲使膠類中藥完全溶解，加NH₄HCO₃溶液稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜過濾，續(xù)濾液中加胰蛋白酶溶液，酶解；

(3)液質(zhì)聯(lián)用儀檢測(cè)

分別取步驟(1)制得的對(duì)照品溶液、步驟(2)制得的待檢測(cè)樣品溶液放入液質(zhì)聯(lián)用儀進(jìn)行檢測(cè)，選擇m/z488.5→693.3、549.3作為檢測(cè)離子對(duì)進(jìn)行MRM掃描，其中選擇m/z488.5→693.3作為多肽的定量離子對(duì)；

(4)樣品中狗骨源成分含量的計(jì)算

以對(duì)照品溶液的多肽的含量為縱坐標(biāo)、峰面積為橫坐標(biāo)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制，線性相關(guān)系數(shù)R≥0.9992，由此計(jì)算出樣品中多肽的含量，然后，按下式計(jì)算出各樣品中狗骨源成分的含量：

狗骨源成分的含量(％)＝(待測(cè)樣品中多肽含量/待測(cè)樣品的重量)÷(6.389×10^-3)×100％；

其中，所述多肽的氨基酸序列為Gln-Gly-Pro-Ser-Gly-Thr-Ser-Gly-Glu-Arg。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(1)及步驟(2)所述的酶解溫度為37℃。

5.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(3)中液質(zhì)聯(lián)用儀檢測(cè)的液相條件為：C₁₈反相色譜柱，流動(dòng)相A為0.1vol％甲酸的水溶液，流動(dòng)相B為0.1vol％甲酸的乙腈溶液，流速0.3ml/min；梯度洗脫：5→20min，流動(dòng)相A 95％→80％，流動(dòng)相B 5％→20％，質(zhì)譜條件：電噴霧正離子模式(ESI⁺)進(jìn)行多反應(yīng)監(jiān)測(cè)。

6.如權(quán)利要求1所述的用于檢測(cè)膠類中藥及其復(fù)方制劑中狗骨源成分含量的組合物，其特征在于，所述膠類中藥為阿膠、黃明膠、龜甲膠、鹿角膠、驢骨膠、牛骨膠、豬骨膠、羊骨膠或其他膠類中藥。

7.權(quán)利要求1所述的組合物或權(quán)利要求2所述的試劑盒在檢測(cè)膠類中藥及其復(fù)方制劑中的狗骨源成分含量中的應(yīng)用。