[發明專利]一種用于檢測動物膠中驢皮源成分含量的組合物、試劑盒及其檢測方法

有效

• 申請號: 201611199214.1
• 申請日: 2016-12-22
• 公開（公告）號: CN106770825B
• 公開（公告）日: 2019-12-03
• 發明（設計）人: 郭尚偉;郝向慧;段小波;徐云鵬;王靜;王玉嬌;石永堅;周祥山;張大偉
• 申請（專利權）人: 東阿阿膠股份有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 11139 北京科龍寰宇知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 孫皓晨<國際申請>=<國際公布>=<進入

1.一種用于檢測動物膠中驢皮源成分含量的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)對照品溶液的制備

1)基質溶液的制備：將稱量好的對照品檢測基質置于量瓶中，加入NH₄HCO₃溶液，超聲使樣品完全溶解，加NH₄HCO₃溶液稀釋至刻度；

2)對照品母液的制備：將稱量好的對照品檢測基質置于量瓶中，加入NH₄HCO₃溶液，超聲使樣品完全溶解，將稱量好的的多肽I、多肽II和多肽III放入該量瓶中，用NH₄HCO₃溶液溶解并稀釋至刻度；

所述多肽I的氨基酸序列為Gly-Ala-Thr-Gly-Pro-Ala-Gly-Val-Arg，多肽II的氨基酸序列為

Gly-Ile-Hyp-Gly-Pro-Val-Gly-Ala-Ala-Gly-Ala-Thr-Gly-Ala-Arg，多肽III的氨基酸序列為Gly-Val-Val-Gly-Leu-Pro-Gly-Gln-Arg，對照品檢測基質為魚皮膠；

3)對照品溶液制備：以步驟1)制得的基質溶液為溶劑，將步驟2)制得的對照品母液稀釋，微孔濾膜過濾，續濾液中加胰蛋白酶溶液，酶解；

(2)待測動物膠溶液的制備

將稱量好的待測動物膠置于量瓶中，加NH₄HCO₃溶液，超聲使動物膠完全溶解，加NH₄HCO₃溶液稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜過濾，續濾液中加胰蛋白酶溶液，酶解；

(3)液質聯用儀檢測

將步驟(1)制得的對照品溶液、步驟(2)制得的待檢測動物膠溶液分別放入液質聯用儀，選擇m/z393.4→499.3、643.3，m/z634.7→830.4、927.5，m/z442.0→726.4、570.3作為檢測離子對進行MRM掃描，其中，m/z393.4→499.3，m/z634.7→830.4，m/z442.0→726.4分別作為多肽I、多肽II和多肽III的定量離子對進行定量檢測；

(4)動物膠中驢皮源成分含量的計算

以對照品溶液的各多肽的含量為縱坐標、峰面積為橫坐標進行標準曲線的繪制，由此計算出動物膠中多肽I、多肽II和多肽III的含量，從而計算出動物膠中驢皮源成分的含量，待檢測動物膠中多肽I的含量記為M1、多肽II的含量記為M2、多肽III的含量記為M3，按下式計算出動物膠中驢皮源成分的含量：

驢皮源成分的含量(％)＝(M1/392.4–M2/633.7)×880/M3×100％。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)及步驟(2)所述的酶解溫度為37℃。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(3)中液質聯用儀檢測的液相條件為：C₁₈反相色譜柱，流動相A為0.1％v/v甲酸的水溶液，流動相B為0.1％v/v甲酸的乙腈溶液，流速0.3ml/min；梯度洗脫：0→40min，流動相A 100％→50％，流動相B 0％→50％，質譜條件：電噴霧正離子模式(ESI⁺)進行多反應監測。