[發明專利]一種桑黃工廠化液體發酵過程中酶活規律的測定方法

有效

• 申請號: 201611198721.3
• 申請日: 2016-12-22
• 公開（公告）號: CN106755283B
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 許謙;杜睿綺;張桂榮;孫迅;朱陶;張海麗
• 申請（專利權）人: 菏澤學院
• 主分類號: C12Q1/40
• 分類號: C12Q1/40;C12Q1/34;C12Q1/44;C12Q1/26
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 張貴賓

本發明特別涉及一種桑黃工廠化液體發酵過程中酶活規律的測定方法。包括：配制培養基；裝罐；滅菌；關閉攪拌，改為直接進蒸汽升溫至119℃?124℃，壓力0.1±0.05Mpa，保溫滅菌；接種；培養；取樣對培養基中的多種酶進行測定。本發明原料選取方便，成本低，利用研究所得配方可以獲得桑黃菌絲體及胞外活性物質的高產。菌絲體產量達到4.6217g/100mL。淀粉酶、羧甲基纖維素酶、半纖維素酶在第7天達到酶活高峰；果膠酶在第6天達到酶活高峰；漆酶、愈創木酚酶在第2天達到酶活高峰；鄰苯二酚氧化酶在第10天和15天分別產生一個酶活高峰。這些規律，對于工廠化液體培養時適時補充合適的營養成分具有較高的指導意義。

（一）技術領域

本發明涉及桑黃，特別涉及一種桑黃工廠化液體發酵過程中酶活規律的測定方法。

（二）背景技術

藥用真菌桑黃具有抗癌、抗氧化、增強免疫調節、抗炎、降血脂和抗病毒等作用 ，在傳統中藥中，其被用于治療傷口、腹痛和淋病。最近的研究強調了其抗癌和肝臟保護功能。其含有三萜、黃酮、多糖等活性成分。

當前，桑黃產品大部分依賴于桑黃子實體，桑黃子實體生長對環境的依賴性很高，生長周期長，產量不穩定。利用液體培養可以較容易地對各種生長影響因素進行控制和優化，獲得穩定高產。

本研究旨在利用成本較低的農產品下腳料和礦物質成分，對它們進行適宜的配比，利用合適的方法進行煮制，來獲得桑黃液體培養產物（菌絲體及活性物質產量）的高產。在進行液體培養的過程中進行酶活的跟蹤測定，了解多種酶活的產生規律，有研究報道的桑黃酶活產生規律，是基于少量實驗室液體培養基培養的前提下獲得的，該規律是在工廠發酵罐中進行小試時獲得的，更具有生產實用性。該規律的把握可以有效指導控制培養基成分的靈活添加，對于桑黃的擴大生產及工業化生產具有一定的指導意義。

（三）發明內容

本發明為了彌補現有技術的不足，為了獲得穩定的液體發酵高產，同時降低成本，本專利進行了桑黃液體發酵過程中酶活規律的研究。

本發明是通過如下技術方案實現的：

一種桑黃培養過程中酶的測定方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）配制培養基：

培養基由以下重量的原料制成：麥麩6-8%，玉米粉2-4%，蛋白胨1-3%，MgSO₄·7H₂O0.05-0.15%，KH₂PO₄ 0.10-0.15%，K₂HPO₄·3H₂O 0.02-0.04%，其余為水，

配制方法：麥麩放入足量的水中，煮沸45-55min，四層紗布過濾，向濾液中依次加入玉米粉、蛋白胨、MgSO₄·7H₂O、KH₂PO₄和K₂HPO₄·3H₂O ，調pH值為6，配制6L培養基；

（2）裝罐：將培養基裝入10L的發酵罐；

（3）滅菌：在攪拌狀態下，夾層蒸汽加熱到105-115℃；關閉攪拌，改為直接進蒸汽升溫至119℃—124℃，壓力0.1±0.05Mpa，保溫滅菌；

（4）接種：火焰圈保護接種，向滅菌后的培養基中接入處于迅速生長期的培養8d的桑黃液體菌種；

（5）培養：T為28±0.5℃；罐壓為0.05±0.005Mpa；空氣流量：0-92h，0.20m3/h,93-358h,0.30m3/h，359-422h，0.20m3/h階段性調節；攪拌：0-62h，20Hz，63-160h，30Hz，161-332h，20Hz，333-422h，10Hz，

取樣對培養基中的多種酶活進行測定。