[發明專利]一種桑黃工廠化液體發酵過程中酶活規律的測定方法

有效

• 申請號: 201611198721.3
• 申請日: 2016-12-22
• 公開（公告）號: CN106755283B
• 公開（公告）日: 2018-06-29
• 發明（設計）人: 許謙;杜睿綺;張桂榮;孫迅;朱陶;張海麗
• 申請（專利權）人: 菏澤學院
• 主分類號: C12Q1/40
• 分類號: C12Q1/40;C12Q1/34;C12Q1/44;C12Q1/26
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 張貴賓

1.一種桑黃工廠化液體發酵過程中酶活規律的測定方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）配制培養基：

培養基由以下重量的原料制成：麥麩6-8%，玉米粉2-4%，蛋白胨1-3%，MgSO₄·7H₂O0.05-0.15%，KH₂PO₄ 0.10-0.15%，K₂HPO₄·3H₂O0.02-0.04%，其余為水，

配制方法：麥麩放入足量的水中，煮沸45-55min，四層紗布過濾，向濾液中依次加入玉米粉、蛋白胨、MgSO₄·7H₂O、KH₂PO₄和K₂HPO₄·3H₂O ，調pH值為6，配制6L培養基；

（2）裝罐：將培養基裝入10L的發酵罐；

（3）滅菌：在攪拌狀態下，夾層蒸汽加熱到105-115℃；關閉攪拌，改為直接進蒸汽升溫至119℃—124℃，壓力0.1±0.05Mpa，保溫滅菌；

（4）接種：火焰圈保護接種，向滅菌后的培養基中接入處于迅速生長期的培養8d的桑黃液體菌種；

（5）培養：T為28±0.5℃；罐壓為0.05±0.005Mpa；空氣流量：0-92h，0.20m3/h,93-358h,0.30m3/h，359-422h，0.20m3/h階段性調節；攪拌：0-62h，20Hz，63-160h，30Hz，161-332h，20Hz，333-422h，10Hz，

取樣分別對培養液的淀粉酶、羧甲基纖維素酶、半纖維素酶、果膠酶、漆酶、鄰苯二酚氧化酶、愈創木酚酶活性進行測定，測定方法如下：

淀粉酶活性測定：可溶性淀粉溶液中加入粗酶液，32-45℃水浴準確保溫，取出后加入配制的DNS試劑，沸水浴加熱，取出冷卻后加入蒸餾水，混勻，通過紫外可見分光光度計測520nm處的OD值；

羧甲基纖維素酶活性測定：羧甲基纖維素鈉溶液中加入粗酶液，42-55℃水浴保溫，取出后加入配制的DNS試劑，沸水浴加熱，取出冷卻后加入蒸餾水，混勻，紫外可見分光光度計測520nm處的OD值；

半纖維素酶活性測定：小麥半纖維素溶液中加入粗酶液，42-55℃水浴保溫，取出后加入配制的DNS試劑,沸水浴加熱，取出冷卻后加入蒸餾水，混勻，紫外可見分光光度計測520nm處的OD值；

果膠酶活性測定：在果膠溶液中加入粗酶液，42-55℃水浴保溫，取出后加入配制的DNS試劑,沸水浴加熱，取出冷卻后加入蒸餾水，混勻，紫外可見分光光度計測520nm處的OD值；

漆酶活性測定：鄰聯甲苯胺溶液、醋酸鹽緩沖液和粗酶液混合得反應液，20-35℃保溫后，用紫外分光光度計于600nm處測光密度值；

鄰苯二酚氧化酶活性測定：鄰苯二酚溶液、磷酸鹽緩沖液、粗酶液混合得反應液，反應液20-35℃保溫后，用紫外分光光度計于400nm處測光密度值；

愈創木酚酶活性測定：愈創木酚溶液、醋酸鹽緩沖液和粗酶液混合得反應液，反應液20-35℃保溫后，用紫外分光光度計于490nm處測光密度值。