[發明專利]一種低成本純化九勝肽-1的方法

有效

• 申請號: 201611197530.5
• 申請日: 2016-12-22
• 公開（公告）號: CN106749526B
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 蘇晨燦;郭添;王慧;韓廣;張忠旗;王萬科;王惠嘉;趙金禮;楊小琳
• 申請（專利權）人: 陜西慧康生物科技有限責任公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/20;C07K1/18
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責任公司 61201
• 代理人: 高雪霞

本發明公開了一種低成本純化九勝肽?1的方法，該方法采用高效液相色譜，先用反相聚合物柱對大批量的九勝肽?1粗品進行純化，除去九勝肽?1粗品中的雜質，再用弱陰離子交換柱將三氟乙酸型九勝肽?1轉化成醋酸型九勝肽?1。本發明純化方法簡單，不僅能得到純度大于99％的九勝肽?1，而且能達到九勝肽?1成本低、收率高、產業化的要求。

技術領域

本發明屬于多肽純化技術領域，具體涉及一種九勝肽-1的純化方法。

背景技術

九勝肽-1又名美立肽，為含有九個氨基酸的美白九肽，主要用于美白亮膚及祛斑。九勝肽-1是一種仿生肽，它和黑色素細胞上的MC1受體有非常好的匹配性，因此可以作為促黑色素細胞激素的對抗劑，競爭性的與MC1受體結合，阻止酪氨酸酶進一步被激活而產生黑色素。九勝肽-1競爭性的封閉黑素母細胞上受體與各種因子信號的入口，弱化了黑素母細胞的活性，減少黑素產生量，14天開始逐步均勻膚色，一個皮膚周期28天后，明顯提亮膚色，呈現肌膚紅潤、白皙，因此九勝肽-1常被用作化妝品原料。

九勝肽-1作為化妝品原料時必須滿足HPLC純度≥99％，然而通過合成得到的九勝肽-1粗品中含有很多雜質，需要進一步提純后才可以作為化妝品原料。傳統純化九勝肽-1的方法純化效率低，得到的九勝肽-1純度低，且所使用的流動相為乙腈，乙腈的用量大、價格昂貴。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于克服現有九勝肽-1純化方法存在的缺點，提供一種成本低、純度高，適合產業化的九勝肽-1純化方法。

解決上述技術問題所采用的技術方案由下述步驟組成：

1、溶樣

將九勝肽-1粗品溶解于蒸餾水中，用濾膜過濾，收集濾液。

2、粗純

采用高效液相色譜法，用反相聚合物柱對濾液進行粗純，填料為F型SBC MCI GEI反相色譜填料，流動相A為0.1mol/L三氟乙酸水溶液，流動相B為0.1mol/L三氟乙酸甲醇溶液，進行梯度洗脫純化，流動相梯度選擇A:B由(70～59):(30～41)到(45～40):(55～60)，收集粗純后的九勝肽-1溶液，減壓濃縮。

3、轉鹽

將步驟2得到的濃縮液用弱陰離子交換柱去除三氟乙酸，轉換成醋酸型九勝肽-1，填料為DEAE高流速瓊脂糖微球，流動相為體積濃度2％的醋酸水溶液，收集醋酸型九勝肽-1溶液，減壓濃縮，得到純度大于99％的醋酸型九勝肽-1。

上述步驟1中，優選九勝肽-1粗品與蒸餾水的質量體積比為1g:15～50mL。

上述步驟2中，流動相梯度優選0到10分鐘A:B由70:30到59:41，15到40分鐘A:B由45:55到40:60。

上述步驟2中，所述F型SBC MCI GEI反相色譜填料的粒徑是30～50μm。

上述步驟3中，所述DEAE高流速瓊脂糖微球的粒徑是50～160μm。

上述步驟2和3中，所述流動相的流速優選4～10mL/分鐘，上樣和洗脫的柱溫優選35～45℃。

本發明具有如下有益效果：

1、本發明方法打破了直接運用反相高效液相色譜法進行反復純化的傳統多肽純化方法，將反相聚合物柱與弱陰離子交換柱結合使用，先對九勝肽-1進行粗純，除去了大部分雜質，再用弱陰離子交換柱進行脫鹽，將三氟乙酸型九勝肽-1轉換成醋酸型九勝肽-1，并進一步純化了多肽，極大地提高了純化效率。

2、本發明方法粗純過程中使用三氟乙酸水溶液和三氟乙酸甲醇溶液做為動相，甲醇用量少且價格低廉，對環境污染小，節省了整個純化過程中流動相的成本，且純化工藝較為環保。