[發明專利]一種通過體胚發生大量繁殖忽地笑的方法

有效

• 申請號: 201611194849.2
• 申請日: 2016-12-16
• 公開（公告）號: CN106605596B
• 公開（公告）日: 2019-06-18
• 發明（設計）人: 賀佳;汪仁;夏冰;江玉梅;韓小康
• 申請（專利權）人: 江蘇省中國科學院植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明提供一種通過體胚發生大量繁殖忽地笑的方法，進行規模化生產和繁殖以滿足市場需要的忽地笑組織培養步驟包括：A.外植體消毒，B.不定芽的誘導，C.愈傷組織的誘導，D愈傷組織的增殖，E愈傷組織的再分化，F.生根培養，H煉苗與移栽。本發明首次將除草劑毒莠定應用于忽地笑的組織培養，獲得了穩定的可大量增殖的忽地笑愈傷組織，愈傷組織誘導率達到95％以上，將忽地笑的繁殖系數至少提高了8?10倍。不僅降低生產成本，而且可以保存母體的全部優良性狀，遺傳性狀穩定。這種方法可在短時間內形成大量的優良試管苗，進行規模化、工廠化生產，為觀賞園藝、制藥等產業以及忽地笑的后續研究提供了大量的原材料。

技術領域

本發明涉及一種體胚發生大量繁殖忽地笑方法，屬于植物的人工繁殖和栽培方法技術領域。

背景技術

忽地笑(Lycoris aurea Herb.)又稱黃花石蒜，主產我國，分布于我國西南、華東、華南、西北地區的16個省區，日本和緬甸也有少量分布。忽地笑的花葉均具有頗高的觀賞價值，其花為金黃色，華亭挺拔，花型奇特；花后冬春季又可觀葉，其葉形似蘭草，姿態優雅。在日本、荷蘭等一些國家，其道路、庭院都廣泛栽培忽地笑，是一種頗受人們喜愛的庭院觀賞植物。

另外，忽地笑亦具有很高的藥用價值，其鱗莖是提取加蘭他敏的良好原料，加蘭他敏在忽地笑中的含量很高，野生資源中發現的最高含量為0.2％。目前加蘭他敏的市場價格為40萬元每公斤，因此忽地笑的人工繁育栽培蘊藏著巨大的市場前景和社會效益。

雖然我國的忽地笑資源豐富，但由于目前忽地笑種球市場需求日益增大。而其栽培技術落后，種球繁殖率低，導致其野生資源遭到亂采濫挖。近幾年來，由于制藥工業的大量提取，原分布最廣、蘊藏量最多的紅花石蒜(L.radiata)和忽地笑(L.aurea)的野生資源也急劇減少。要解決這一問題，組織培養是一條有效途徑，但長期以來忽地笑的組織培養受其種球繁殖率低、褐化等問題較為嚴重的影響，效率一直較低。之前報道的忽地笑組織培養大多以誘導不定芽為主，少數誘導愈傷的報道主要以小鱗莖和種子為材料，而且誘導率和再分化率較低，繁殖系數不高。本發明通過先誘導出忽地笑的不定芽，再對其無菌苗進行誘導，從體細胞胚的發生途徑進行忽地笑愈傷組織誘導，首次將除草劑毒莠定用于忽地笑的組織培養，獲得了穩定的可繼代增殖的愈傷組織，誘導率可達到95％以上，經過合理的激素調配，誘導出的愈傷組織可再分化出大量的不定芽。此方法對比傳統的植物生長激素調節，將忽地笑的繁殖系數至少提高了8倍以上，大大提高了忽地笑組培的繁殖效率。

發明內容

本發明的目的在于提供一種體胚發生的忽地笑的繁殖方法，進行規模化生產以及以忽地笑組培為基礎的其他學科的研究工作的需要。

本發明的技術方案是這樣實現的，該種忽地笑繁殖方法的主要特點是：

A外殖體消毒：選取在-4℃，保存30天以上的忽地笑小鱗莖，剝去外層鱗片，切除根部，用0.1％的安利洗滌液在搖床上震蕩洗滌15～20min，流水沖洗30～60min后，再在超凈工作臺上用75％的酒精漂洗30s，無菌水清洗4遍后，用含2～5％次氯酸鈉滅菌20～30min，無菌水沖洗4-5遍，最后用無菌濾紙吸干表面水分；

B叢生芽誘導：將消毒好的忽地笑切去上部1/2，將帶有鱗莖盤的鱗莖均勻分為4-8塊，接種到以下培養基中：MS基本培養基，適當濃度的植物生長激素，蔗糖(食用糖)20～40g/L，適當pH值；培養溫度28±1℃，光照強度1000～3000lx，光照時間10～16h，進行光照培養；

C愈傷組織誘導：將分化而成叢生芽(含小鱗莖)切開，去除原有鱗片和褐化部分，接種到以下培養基中：MS基本培養基，蔗糖(食用糖)20～40g/L，適當濃度植物生長激素，適當pH值；培養溫度28±1℃；

D愈傷組織增殖：將誘導出20天左右的愈傷組織切下，接種到以下培養基上：MS基本培養基，適當植物生長激素，培養溫度28±1℃，光照時間10～16h，進行光照培養30～40天；