[發明專利]一種通過體胚發生大量繁殖忽地笑的方法

有效

• 申請號: 201611194849.2
• 申請日: 2016-12-16
• 公開（公告）號: CN106605596B
• 公開（公告）日: 2019-06-18
• 發明（設計）人: 賀佳;汪仁;夏冰;江玉梅;韓小康
• 申請（專利權）人: 江蘇省中國科學院植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種通過體胚發生大量繁殖忽地笑的方法，其特征在于：

A 外植體消毒：選取在-4℃，保存30天以上的忽地笑小鱗莖，剝去外層鱗片，切除根部，經消毒試劑消毒后，無菌水沖洗4-5遍，最后用無菌濾紙吸干表面水分；

B 叢生芽誘導和小鱗莖培養：將消毒好的忽地笑切去上部1/2，將帶有鱗莖盤的鱗莖均勻分為4-8塊，接種到以下培養基中：MS基本培養基，植物生長激素6-芐 基腺嘌呤（6-BA）3.0~5.0mg/L，吲哚乙酸（IBA）0.1~0.5mg/L蔗糖20~40g/L，適當pH值；培養溫度28±1℃，光照強度1000~3000lx，光照時間10~16h，進行光照培養，之后將誘導出的不定芽分別接種到相同培養基上，繼續培養20~30天；

C 愈傷組織誘導：將分化而成的叢生芽切開，去除原有鱗片和褐化部分，接種到以下培養基中：MS基本培養基，蔗糖20~40g/L，植物生長激素毒莠定（Picolarm）1.0~3.0mg/L，6-芐基腺嘌呤（6-BA）0.1~0.5mg/L，適當pH值；培養溫度28±1℃；

D愈傷組織增殖：將誘導出20天左右的愈傷組織切下，接種到以下培養基上：MS基本培養基，植物生長激素毒莠定（Picolarm）1.0~2.0mg/L，6-芐 基腺嘌呤（6-BA）1.0~2.0mg/L，培養溫度28±1℃，光照時間10~16h，進行光照培養30~40天；

E 愈傷組織的分化：將進行增殖培養后的愈傷組織切成2cm左右的小塊，接種到以下培養基上：MS基本培養基，植物生長激素6-芐 基腺嘌呤（6-BA）4.0~6.0mg/L，萘乙酸（NAA）0.1~0.5mg/L，培養溫度25±1℃，光照時間10~16h，進行光照培養30~40天；

F 生根培養：選取生長健壯的試管苗，連同小鱗莖接種到如下培養基中：1/2MS或MS基本培養基，蔗糖60~90g/L，植物生長激素萘乙酸（NAA）400~500mg/L，適當PH值，進行光照培養50~60天。

H 煉苗移栽：將組培瓶蓋打開，并添加少量的蒸餾水，進行有菌條件馴化；用鑷子將組培苗從瓶中取出，移栽到已經滅菌的栽培基質中，進行遮陰馴化3周，期間不定期的噴施1/2MS營養液。