[發明專利]一種胸腺法新的合成方法

有效

• 申請號: 201611192924.1
• 申請日: 2016-12-21
• 公開（公告）號: CN108218980B
• 公開（公告）日: 2020-12-08
• 發明（設計）人: 張貴民;王孝花;李彥磊;趙亮亮
• 申請（專利權）人: 魯南制藥集團股份有限公司
• 主分類號: C07K14/575
• 分類號: C07K14/575;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種胸腺法新的合成方法，采用先三段分別合成，所述三段分別是片段1～8、片段9～18和片段19～28，再片段間進行縮合的方法，其特征在于該方法包括以下步驟： (1)將Fmoc-Asn(Trt)-OH和替代值為0.3mmol/g～0.8mmol/g的2-氯三苯甲基(CTC)樹脂在DMF溶液中混合，加入DIEA溶液，經酯化反應得到Fmoc-Asn(Trt)-CTC樹脂；

(2)將Fmoc-Asn(Trt)-CTC樹脂和體積比10％-50％的哌啶DMF溶液組成的脫保護液混合，得到H₂N-Asn(Trt)-CTC樹脂，將Fmoc-Glu(OtBu)-OH和H₂N-Asn(Trt)-CTC樹脂耦合，得到Fmoc-Glu(OtBu)-Asn(Trt)-CTC樹脂，重復以上步驟，得到Fmoc-Glu(OtBu)-Val-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)- Asn (Trt)-CTC樹脂，即片段1-8樹脂；將所述片段1-8樹脂加入10％-50％哌啶/DMF溶液分別脫Fmoc保護基10min和20min，抽干脫保護液，用DMF洗滌樹脂；

(3)將Fmoc-Lys(Boc)-OH和替代值為0 .3mmol/g～0 .8mmol/g的2-氯三苯甲基(CTC)樹脂混合，經酯化反應得到Fmoc-Lys(Boc)-CTC樹脂；

(4)將Fmoc-Lys(Boc)-CTC樹脂和體積比10％-50％的哌啶DMF溶液組成的脫保護液混合，得到H₂N-Lys(Boc)-CTC樹脂，將Fmoc-Lys(Boc)-OH和H₂N-Lys(Boc)-CTC樹脂耦合，得到Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-CTC樹脂，重復以上步驟，得到Fmoc-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu (OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-CTC樹脂，即片段9-18樹脂；將所述片段9-18樹脂加入10％-50％哌啶/DMF溶液分別脫Fmoc保護基10min和20min，抽干脫保護液，用DMF洗滌樹脂；

(5)將Fmoc-Glu(OtBu)-OH和替代值為0.3mmol/g～0.8mmol/g的2-氯三苯甲基(CTC)樹脂混合，經酯化反應得到Fmoc-Glu(OtBu)-CTC樹脂；

(6)將Fmoc-Glu(OtBu)-CTC樹脂和體積比10％-50％的哌啶DMF溶液組成的脫保護液混合，得到H₂N-Glu(OtBu)-CTC樹脂，將Fmoc-Ser(tBu)-OH和H₂N-Glu(OtBu)-CTC樹脂耦合，得到Fmoc-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-CTC樹脂，重復以上步驟，得到Fmoc-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Ala-Ala-Val-Asp(OtBu)-Thr(tBu)-Ser (tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-CTC樹脂，即片段19-28樹脂；

(7)將片段19-28樹脂，加入10％-50％哌啶DMF溶液分別脫保護10min和20min，抽干脫保護液，用DMF洗滌樹脂，使用乙酸酐和有機堿對片段19-28N末端氨基乙酰化得到Ac-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Ala-Ala-Val-Asp(OtBu)-Thr(tBu)- Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu-CTC樹脂，即片段Ac-19-28樹脂；所述有機堿為吡啶、NMM或DIEA中的一種，乙酸酐摩爾量為樹脂摩爾量的5～10倍，有機堿摩爾量為樹脂摩爾量的1～5倍；

(8)用含5％TFA的DCM溶液將步驟(2)、步驟(4)和步驟(7)中合成的帶側鏈保護基的肽片段從樹脂上切落，得到H₂N-Glu(OtBu)-Val-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asn(Trt)-OH，即片段1-8，H₂N-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp (OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-OH，即片段9-18，Ac-Ser(tBu)- Asp(OtBu)-Ala-Ala-Val-Asp(OtBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-OH ，即片段19-28；

(9)片段合成選用HBTU、HATU或TBTU中的一種，HOBT、HOAT或6-Cl-HOBT中的一種，DIEA或NMM中的一種，即3種試劑的組合作為縮合試劑，帶保護基的氨基酸的用量是1 .5～2 .5倍量，先將片段9-18用V(DMF)/V(DCM)等于3 .0的溶劑溶解，后加入等摩爾量的HBTU、HATU或TBTU中的一種和HOBT、HOAT或6-Cl-HOBT中的一種，待溶解后滴加2倍摩爾量的DIEA或NMM中的一種，30分鐘后將反應溶液倒入到用NMP溶解的片段1-8溶液中，反應完全后得到片段1-18，以同樣的方法將片段19-28與片段1-18反應得到多肽1-28；

(10)向多肽1-28中加入切割試劑A、B或C中的一種，脫去保護基后加入冰乙醚沉淀，過濾，冰乙醚洗滌，減壓干燥得胸腺法新粗品，其中A為TFA、茴香硫醚、水、苯酚和EDT組成的混合溶液，其體積比為82 .5：5：5：5：2 .5；B為TFA、茴香硫醚、茴香醚和EDT組成的混合溶液，其體積比為90:5:3:2；C為TFA、Tis和水組成的混合溶液，其體積比為95：2.5：2.5。