[發明專利]一種胡蘿卜軟腐歐文氏菌、其分泌的植物免疫激活蛋白及應用

有效

• 申請號: 201611190279.X
• 申請日: 2016-12-21
• 公開（公告）號: CN106867929B
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發明（設計）人: 賈振華;宋水山;劉方;黃亞麗;宋聰;郝少彥;李海利;趙芊;黃媛媛;馬宏;劉昆昂
• 申請（專利權）人: 河北省科學院生物研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C07K14/27;C12N15/31;C12P21/02;A01N47/44;A01P3/00;C12R1/18
• 代理公司: 石家莊新世紀專利商標事務所有限公司 13100
• 代理人: 楊欽祥;董金國

1.一種胡蘿卜軟腐歐文氏菌 （Erwinia carotovora subsp. Carotovora） Ecc 36，該菌株于2015年11月27日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物菌種保藏中心進行了保藏，保藏號為：CGMCC No. 11751。

2.權利要求1所述的胡蘿卜軟腐歐文氏菌（Erwinia carotovora subsp. Carotovora）Ecc 36分泌的植物免疫激活蛋白HrpN_EccPR，其特征在于：其氨基酸序列如 SEQ ID NO:1 所示。

3.表達權利要求 2 所述植物免疫激活蛋白 HrpNEccPR的基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO:2 所示。

4.權利要求2所述的植物免疫激活蛋白HrpN_EccPR的粗品的制備方法，其特征在于：將所述胡蘿卜軟腐歐文氏菌Ecc 36發酵液離心收集菌體，用無菌水懸浮，將懸浮液煮沸，離心收集上清，冷凍干燥，獲得所述植物免疫激活蛋白HrpN_EccPR粗品。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于：所述無菌水的用量為發酵液質量的1/2，將所述懸浮液煮沸30分鐘，在9000rpm下將懸浮液離心30分鐘。

6.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于：所述植物免疫激活蛋白HrpN_EccPR粗品中蛋白含量不低于43wt%。

7.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于：其具體步驟為：將所述胡蘿卜軟腐歐文氏菌Ecc36菌株在LB固體培養基上采用劃線法，25℃培養24小時，獲得單菌落，挑取單菌落于液體LB培養基中，于25℃過夜培養，獲得Ecc36菌株種子，然后以10wt%接種于液體LB培養基中，25℃培養48小時，9000rpm離心30分鐘，收集菌體，加入原液體LB培養基1/2倍的無菌水懸浮，將其懸浮液煮沸30分鐘，9000rpm離心30分鐘，收集上清，冷凍干燥，獲得所述植物免疫激活蛋白HrpN_EccPR粗品。

8.權利要求2所述的植物免疫激活蛋白HrpN_EccPR在制備防治植物軟腐病生物制劑中的應用。

9.利用權利要求2所述的植物免疫激活蛋白HrpN_EccPR制備的噴施藥液，其特征在于：其中植物免疫激活蛋白HrpN_EccPR的含量為18-100mg/L。