[發(fā)明專利]一種胡蘿卜軟腐歐文氏菌、其分泌的植物免疫激活蛋白及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611190279.X
• 申請日: 2016-12-21
• 公開（公告）號: CN106867929B
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 賈振華;宋水山;劉方;黃亞麗;宋聰;郝少彥;李海利;趙芊;黃媛媛;馬宏;劉昆昂
• 申請（專利權(quán)）人: 河北省科學(xué)院生物研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C07K14/27;C12N15/31;C12P21/02;A01N47/44;A01P3/00;C12R1/18
• 代理公司: 石家莊新世紀(jì)專利商標(biāo)事務(wù)所有限公司 13100
• 代理人: 楊欽祥;董金國

本發(fā)明公開了一種胡蘿卜軟腐歐文氏菌，保藏號為：CGMCC No.11751，其分泌的植物免疫激活蛋白HrpN_EccPR具有防治植物軟腐病的效果。本發(fā)明還公開了所述植物免疫激活蛋白HrpN_EccPR的蛋白序列以及表達(dá)該蛋白的基因序列，并進(jìn)一步提供了獲得所述植物免疫激活蛋白的方法。本發(fā)明利用篩選出的保藏號為CGMCC No.11751的菌株產(chǎn)生的激活蛋白HrpN_EccPR粗品對植物尤其是大白菜軟腐病有良好的拮抗作用，其能夠有效防治大白菜軟腐病的發(fā)生。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種一種胡蘿卜軟腐歐文氏菌、其分泌的植物免疫激活蛋白及應(yīng)用。

背景技術(shù)

軟腐歐文氏菌是一種廣泛的致病菌，主要發(fā)生在大白菜、卷心菜、菜花、馬鈴薯等作物上，主要為害葉、莖及塊莖。葉染病近地面老葉先發(fā)病，病部呈不規(guī)則暗褐色病斑，濕度大時腐爛。近些年來，由于多方面的原因，重大病害出現(xiàn)的頻率和面積明顯增加，造成的產(chǎn)量損失都在50-60%左右。而這些蔬菜是我國北方地區(qū)不可缺少的重要蔬菜，但每年因病害的損失估計可達(dá)數(shù)十億元。為了對付嚴(yán)重的這些蔬菜軟腐病害，農(nóng)業(yè)生產(chǎn)者大量使用化學(xué)農(nóng)藥。化學(xué)農(nóng)藥的施用也確實對蔬菜病害的控制做出了巨大的貢獻(xiàn)。但是，化學(xué)農(nóng)藥的大量施用也正在顯示著嚴(yán)重的負(fù)面影響。因此，隨著生物防治、綠色農(nóng)業(yè)等呼聲日益高漲，植物抗病免疫技術(shù)的研究成為近年興起的重要研究領(lǐng)域。

植物免疫抗病激活劑是一些生物和非生物因子，能夠誘導(dǎo)植物獨(dú)特的生理狀態(tài)，植物能夠更好或更快或者既好又快的調(diào)配防衛(wèi)反應(yīng)的生理狀態(tài)，使植物防御病蟲害的狀態(tài)處在臨界，達(dá)到一觸即發(fā)，當(dāng)病害在侵染植物時，植物會在短時間內(nèi)借助于誘導(dǎo)因子激發(fā)植物整體的抗性水平，調(diào)動整個植物的免疫能力，激活植物自身抗病相關(guān)基因的表達(dá)，抵抗病原物的侵染，自身不對病原菌起作用，不會使病原菌產(chǎn)生抗藥性，用量低、高效、誘導(dǎo)的植物抗病譜廣、抗病持續(xù)時間長，這對于植物病害的可持續(xù)控制具有重要的意義。

目前利用植物免疫激活劑生物防治蔬菜病害的研究相對較少，因此，迫切需要篩選出一種能夠高效分泌植物蛋白激活劑的微生物菌株，從而通過植物免疫激活劑降低軟腐歐文氏菌給蔬菜生產(chǎn)帶來的危害。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服目前利用化學(xué)農(nóng)藥防治十字花科植物軟腐病帶來的環(huán)境危害，提供一種能夠防治軟腐病害，尤其是能夠高效拮抗大白菜軟腐病害的植物免疫蛋白激發(fā)子，并且本發(fā)明還提供了一種分泌上述植物免疫激活蛋白的生物菌株，并提供其能夠表達(dá)該蛋白的基因序列和蛋白質(zhì)序列，本發(fā)明還提供工程菌構(gòu)建獲得免疫激活蛋白。

為了達(dá)到上述發(fā)明目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明所述的胡蘿卜軟腐歐文氏菌Erwinia carotovora pv. Carotovorastrain Ecc 36（簡稱Ecc36）于2015年11月27日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物菌種保藏中心進(jìn)行了保藏，保藏號為：CGMCC No. 11751。

進(jìn)一步的，本發(fā)明所述的Ecc36能夠分泌植物免疫激活蛋白HrpN_EccPR，該蛋白序列如SEQ ID NO:1所示。

進(jìn)一步的，本發(fā)明所述的植物免疫激活蛋白HrpN_EccPR能引起植物對病原菌的拮抗作用。

進(jìn)一步的，本發(fā)明所述的植物免疫激活蛋白HrpN_EccPR表達(dá)基因hrpNecc36的序列如SEQ ID NO:2所示。