[發明專利]一種夾心型乙型肝炎病毒標志物免疫傳感器的構建方法及應用

有效

• 申請號: 201611190067.1
• 申請日: 2016-12-21
• 公開（公告）號: CN106596942B
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發明（設計）人: 王平;李明黨;馮金慧;李月云;董云會;裴福斌;陳鵬
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N33/576
• 分類號: G01N33/576
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種夾心型乙型肝炎病毒標志物免疫傳感器的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）將直徑為3.0 ~ 5.0 mm的玻碳電極用Al₂O₃拋光粉拋光成鏡面，在無水乙醇中超聲清洗干凈；

（2）利用計時電流法，在-0.2 V下，將拋光好的玻碳電極置于5.0 mL、1.0 wt% ~ 2.0wt%的氯金酸溶液中，電鍍25 ~ 35 s，在電極表面形成電沉積金薄膜，用超純水沖洗電極表面，室溫下晾干；

（3）將上述電極表面浸入30 mL、1.0 mmol/L的4-氨基苯硫酚溶液，浸泡2.0 h，超純水沖洗，室溫下晾干；

（4）繼續將電極浸入50 mL、0.04 ~ 0.05 mg/mL的金納米粒子分散液，浸泡2.0 h，超純水沖洗，室溫下晾干；

（5）將6.0 μL、5.0 ~ 10.0 μg/mL的乙型肝炎病毒標志物捕獲抗體Ab₁滴加到電極表面，4.0 °C冰箱中干燥；

（6）繼續將3.0 μL、0.5 wt% ~ 1.0 wt%的牛血清蛋白溶液滴加到電極表面，用以封閉電極表面上非特異性活性位點，pH=7.0磷酸鹽緩沖液沖洗電極表面，4.0 °C冰箱中晾干；

（7）繼續滴加6.0 μL、0.00001 ~ 100 ng/mL的一系列不同濃度的乙型肝炎病毒標志物抗原溶液，4 °C冰箱中干燥；

（8）將6.0 μL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的吸附硫瑾的鉑納米線@SBA-15微球/檢測抗體Ab₂孵化物分散液滴涂于電極表面，置于4.0 °C冰箱中，靜置40 min，用pH=7.0的磷酸鹽緩沖液沖洗，4.0 °C冰箱中干燥，制得一種夾心型乙型肝炎病毒標志物免疫傳感器。

2. 如權利要求1所述的一種夾心型乙型肝炎病毒標志物免疫傳感器的構建方法，所述金納米粒子分散液和吸附硫瑾的鉑納米線@SBA-15微球/檢測抗體HBs-Ab₂孵化物分散液的制備，包括以下幾個步驟：

（1）金納米粒子分散液的制備

將1.0 ~ 2.0 mL、1.0 wt%的氯金酸溶液加入到99.0 mL超純水中，加熱至沸騰，加入1.5 ~ 3.5 mL、1.0 wt%的檸檬酸鈉溶液，繼續回流10 ~ 20 min，后冷卻至室溫，得到金納米粒子分散液；

（2）吸附硫瑾的鉑納米線@SBA-15微球/檢測抗體HBs-Ab₂孵化物分散液的制備

①鉑納米線@SBA-15微球的制備

取1.0 ~ 1.5 mL、12 wt%的氯亞鉑酸鉀溶液置于100 mL 燒杯中，置入0.4 ~ 0.6 g的SBA-15粉末，攪拌均勻，超聲15 ~ 20 min后，置于25 °C真空干燥箱內干燥24 h，繼續加入2.0 ~ 3.0 mL、1.0 mol/mL的抗壞血酸溶液后，置于25 °C真空干燥箱內還原1.0 h，繼續加入5.0 ~ 7.0 mL、10 wt%的氫氟酸溶液，持續攪拌20 ~ 40 min后，離心，用超純水洗滌，將所得到的固體置于30 °C真空干燥箱內干燥24 h，得到鉑納米線@SBA-15微球；

②吸附硫瑾的鉑納米線@SBA-15微球的制備

稱取40 ~ 50 mg鉑納米線@SBA-15微球浸入到10 mL、1.0 ~ 1.5 mol/mL的硫瑾溶液中，超聲分散，并在振蕩器中持續振蕩6.0 h后，離心，用超純水洗滌，將所得到的固體置于30 °C真空干燥箱內干燥24 h，得到吸附硫瑾的鉑納米線@SBA-15微球；

③吸附硫瑾的鉑納米線@SBA-15微球/檢測抗體HBs-Ab₂孵化物分散液的制備

取2.0 ~ 6.0 mg吸附硫瑾的鉑納米線@SBA-15微球分散到1.0 mL超純水中，加入1.0 ~2.0 mL、20 ~ 30 μg/mL的乙型肝炎病毒標志物檢測抗體Ab₂分散液，置于4.0 °C恒溫振蕩培養箱中振蕩孵化6.0 ~ 8.0 h后，在5000 rpm轉速下離心5.0 ~ 10.0 min，得到下層沉淀，加入1.0 mL、pH=7.0磷酸鹽緩沖溶液離心洗滌1次，得下層沉淀，加入1.0 mL、pH=7.0磷酸鹽緩沖溶液，分散均勻，得到吸附硫瑾的鉑納米線@SBA-15微球/檢測抗體Ab₂孵化物分散液，在4.0 °C下保存。