[發明專利]一種低鹽泡菜微生態添加劑及其制備方法

有效

• 申請號: 201611189656.8
• 申請日: 2016-12-21
• 公開（公告）號: CN106754506B
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發明（設計）人: 唐垚;陳功;張其圣;李恒;汪冬冬;伍亞龍
• 申請（專利權）人: 四川東坡中國泡菜產業技術研究院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12P21/00;A23L19/20;C12R1/225
• 代理公司: 成都九鼎天元知識產權代理有限公司 51214
• 代理人: 呂玲

1.一種低鹽泡菜微生態添加劑，其特征在于該添加劑為戊糖乳桿菌（Lactobacillus pentosus）PCYSWX-5制備的細菌素，該戊糖乳桿菌于2016 年7 月15日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCC No.12793。

2.如權利要求1所述低鹽泡菜微生態添加劑的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

（1）將戊糖乳桿菌PCYSWX-5接入滅菌后的液體培養基中，于30～40℃培養24～48 小時，得到種子液；

（2）將步驟（1）得到的種子液按接種量1％～15％接種到發酵培養基中進行發酵培養，培養條件：30～37℃，通氣量0.5～2.5vvm，轉速150～300rpm，發酵30～ 48小時；

（3）將步驟（2）發酵得到的發酵液通過12000轉/分鐘離心15 分鐘后取上清液，在上清液中慢慢加入無水硫酸銨，緩慢攪動使其完全溶解，直至硫酸銨飽和度達80％，置于4℃靜置過夜，然后將其在4℃，13000 轉/分鐘的條件下冷凍離心20～30分鐘，得到細菌素沉淀粗提物；

（4）將步驟（3）細菌素粗提物進一步采用Sephadex G-25凝膠過濾層析進行純化，凝膠柱用10mM 硫酸鈉緩沖液進行預平衡，然后將硫酸銨沉淀的樣品溶解于0.10M 的磷酸鹽緩沖液PBS后上柱，上柱體積為15ml，固定流速0.5ml/min，分段收集，每段2ml，通過抑菌實驗檢測每段收集液活性，有活性的收集液通過疏水層析進行脫鹽，最后通過反相高效液相層析進行進一步純化，從而得到純品添加劑；所述液體培養基的配制如下：蛋白胨9～11g，牛肉膏9～11g，酵母浸粉4～6g，葡萄糖18～23g，檸檬酸胺1～3g，乙酸鈉3～6g，磷酸氫二鉀1～3g，吐溫80 0～1.1mL，硫酸鎂0.1～0.2g，硫酸錳0.03～0.06，水1000mL；所述發酵培養基包括碳氮質量比為1∶2～20的發酵底物，發酵底物按照與水的質量比為3 ～20∶100 配制成發酵培養基。

3.根據權利要求2所述低鹽泡菜微生態添加劑的制備方法，其特征在于：硫酸鈉緩沖液的pH值為7.0。

4.根據權利要求2所述低鹽泡菜微生態添加劑的制備方法，其特征在于：所述磷酸鹽緩沖液PBS的pH值為6.8。