[發(fā)明專利]一種利用蝦蟹殼制備的植物免疫誘抗劑及其制備方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611187060.4
• 申請日: 2016-12-20
• 公開（公告）號: CN106719901A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 葛亞明;劉俊稚;許賽賽;楊淑蘅
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: A01N65/36
• 分類號: A01N65/36;A01N63/02;A01N43/16;A01P3/00
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務(wù)所有限公司33109
• 代理人: 尉偉敏

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種利用蝦蟹殼制備的植物免疫誘抗劑及其制備方法。

背景技術(shù)

植物免疫誘抗劑也叫植物疫苗，是一類新型生物農(nóng)藥，具有顯著防病、防凍、增產(chǎn)、改善品質(zhì)的效果，對人畜無害、不污染環(huán)境。是繼人用疫苗、動物疫苗后，疫苗工程技術(shù)出現(xiàn)的新領(lǐng)域，也是國際上生物農(nóng)藥創(chuàng)制較為熱門的研究方向。

植物免疫誘抗劑對農(nóng)作物病蟲害沒有直接的殺滅作用，而是由外源生物或分子通過誘導(dǎo)或激活植物所產(chǎn)生的抗性物質(zhì)，對某些病原物產(chǎn)生抗性或抑制病菌的生長。當其施用在農(nóng)作物上后，通過誘導(dǎo)農(nóng)作物產(chǎn)生抵御或防控農(nóng)作物病蟲害的物質(zhì)，從而達到防治病蟲害的目的。據(jù)不完全統(tǒng)計，目前，國內(nèi)已經(jīng)在農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所獲得正式登記的植物免疫誘抗劑主要有康壯素(蛋白質(zhì)激發(fā)子)、益微菌(枯草芽孢桿菌)、殼寡糖和脫落酸等藥物品種。有關(guān)植物免疫誘抗劑的研究與利用，目前也已經(jīng)得到了政府有關(guān)管理和推廣部門及廣大農(nóng)民的認可，其在保護植物健康生長、保障食品和生態(tài)安全方面發(fā)揮著越來越重要的作用。未來，植物免疫誘抗劑農(nóng)藥將有望成為具有巨大發(fā)展前景的新型戰(zhàn)略產(chǎn)業(yè)。

幾丁質(zhì)是已被確定的具有激發(fā)子活性的寡糖之一。幾丁質(zhì)有大量的來源，最為主要的來源為蝦蟹殼，其含量為20％～40％，充分利用蝦蟹殼來源，開發(fā)更為高效的幾丁質(zhì)植物免疫誘抗劑具有一定的市場前景。目前，利用幾丁質(zhì)制備植物免疫誘抗劑已有少量研究。中國專利CN105746591A公開了一種利用蟹殼制備植物免疫誘抗劑的方法，該專利對蟹殼中的幾丁質(zhì)進行酯化并以此作為植物免疫誘抗劑的主體。然而，從蟹殼中直接提取幾丁質(zhì)的水溶性較差，而且?guī)锥≠|(zhì)酯化會使水溶性的進一步降低，使其移動性受到限制，難以涉足長距離信號的傳導(dǎo)過程，使具有激發(fā)子活性的幾丁質(zhì)片段難以更好發(fā)揮其有效作用，對植物誘導(dǎo)抗病性大幅降低。

發(fā)明內(nèi)容

針對幾丁質(zhì)難以涉足長距離信號的傳導(dǎo)、誘導(dǎo)植物抗病性不足的問題，本發(fā)明提供了一種利用蝦蟹殼制備的植物免疫誘抗劑及其制備方法。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)實現(xiàn)的：

一種利用蝦蟹殼制備的植物免疫誘抗劑，所述植物免疫誘抗劑包括如下重量配比的原料：改性幾丁質(zhì)3～8份、中藥提取物0.5～1份、磷酸鹽0.1～0.5份、有機酸0.1～0.5份、水50～150份。

優(yōu)選地，所述中藥提取物包括如下重量配比的原料：黃連3～8份、板藍根5～8份、黃芩5～10份、黃柏10～15份、大黃3～5份、魚腥草3～5份、大青葉3～5份、穿心蓮1～5份、五味子3～8份，其制備方法如下：將黃連、板藍根、黃芩、黃柏、大黃、魚腥草、大青葉、穿心蓮、五味子混合并以固液重量比1：30～40浸入40wt％～60wt％乙醇水溶液中，于70～80℃條件下保溫3～4小時后過濾，對過濾液進行噴霧干燥，收集干燥物，即為中藥提取物。

優(yōu)選地，所述噴霧干燥為離心噴霧干燥，出口溫度為80～90℃，入口溫度為300～320℃，離心噴霧頭轉(zhuǎn)速為8000～12000轉(zhuǎn)/分。

優(yōu)選地，所述磷酸鹽為磷酸氫鋁、磷酸銅、磷酸鈣、磷酸鐵和磷酸鎂中的一種或幾種。

優(yōu)選地，所述有機酸為水楊酸和茉莉酸中的一種或兩種。

優(yōu)選地，所述改性幾丁質(zhì)的制備步驟如下：

1)取蝦蟹殼、去其殘肉，洗凈，于80～90℃條件下烘干后，粉碎至100～150目，得蝦蟹殼粉末；

2)取蝦蟹殼粉末按固液重量比1：30～40浸入0.5～1.5mol/L的鹽酸溶液中，升溫至60～80℃并保溫4～6小時后過濾，以水將蝦蟹殼粉末洗至中性；

3)將洗至中性的蝦蟹殼粉末以固液重量比1：20～30浸入5～10g/L的氫氧化鈉溶液中，升溫至40～60℃并保溫4～6小時后過濾，以水將蝦蟹殼粉末洗至中性；

4)將洗至中性的蝦蟹殼粉末以固液重量比1：20～30浸入10wt％～15wt％的雙氧水溶液中，升溫至80～100℃并保溫2～4小時后過濾，以水沖洗并于80～90℃條件下烘干，即得蝦蟹幾丁質(zhì)；

5)將蝦蟹幾丁質(zhì)以固液重量比1：4～6浸入40wt％～50wt％的氫氧化鈉溶液中，將混合溶液裝入不銹鋼容器中，通入氮氣，升溫至70～80℃，保溫72～96小時，過濾，除去堿液，以水將蝦蟹幾丁質(zhì)洗至中性，于80～90℃條件下烘干后，即得脫乙酰幾丁質(zhì)；

6)取脫乙酰幾丁質(zhì)以固液重量比1：30～50溶于飽和碳酸氫銨溶液中，于室溫下靜置50～100h后，升溫至60～70℃，保溫1～2小時，真空濃縮該反應(yīng)液并進行真空冷凍干燥，即得銨基化脫乙酰幾丁質(zhì)；