[發明專利]肉制品中動物源性成分的鑒定方法及鑒定試劑盒

有效

• 申請號: 201611185286.0
• 申請日: 2016-12-20
• 公開（公告）號: CN108220450B
• 公開（公告）日: 2021-08-03
• 發明（設計）人: 吳昊;謝文佳;王艷麗;郭良起
• 申請（專利權）人: 河南廣電計量檢測有限公司;廣州廣電計量檢測股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 鄭彤

本發明公開了一種肉制品中動物源性成分的鑒定方法，其是采用實時熒光重組酶聚合酶擴增技術，所述的鑒定方法包括如下步驟：S1、制備待測樣品；S2、從所述的待測樣品中提取總DNA；S3、設計篩選引物和探針；S4、準備擴增試劑；S5、進行實時熒光重組酶聚合酶擴增；S6、判定結果。所述的檢測方法反應靈敏、快速，無需依賴昂貴、復雜的設備，能夠滿足食品檢測現場快速檢測的需求。

技術領域

本發明涉及一種食品檢測領域，具體的，本發明涉及一種肉制品中動物源性成分的鑒定方法及鑒定試劑盒。

背景技術

近年來，國內外市場上的肉及肉制品摻假事件屢屢發生，這些不法行為不但破壞了公平貿易，給消費者帶來經濟損失，更重要的是也引起了食品過敏、宗教信仰、食品安全等方面擔憂和恐慌。

目前，人們主要采用聚合酶鏈式反應(PCR技術)特別是所謂的實時熒光定量PCR(Real-time PCR)技術進行肉及肉制品中動物源性(包括豬源性)成分的鑒定，以打擊肉及肉制品中的摻假行為。我國已頒布的食品及飼料中動物源性成分鑒別的國家標準和行業標準主要采用(Real-time)PCR技術，具有準確、高效、快速、靈敏的特點，并已經形成了成熟的方法體系。

然而，PCR技術是一種變溫核酸擴增技術，其反應必須經過變性、退火、延伸三個步驟的多次(約40次)循環，每個步驟均在不同的溫度下進行，需要復雜的溫度循環控制設備，必須在專業的實驗室才可以實現，一定程度上限制了它的應用和推廣，難以滿足現場快速檢測的需要。

發明內容

基于此，本發明在于克服現有技術的缺陷，提供一種新型的肉制品中動物源性成分的鑒定方法，所述的鑒定方法是采用實時熒光重組酶聚合酶擴增(real time RPA)技術對肉制品中動物源性成分進行鑒定。本發明所述的實時熒光重組酶聚合酶擴增技術反應靈敏、快速，無需依賴昂貴、復雜的溫度循環控制設備，能夠滿足食品檢測現場快速檢測的需求。

其技術方案如下：

一種肉制品中動物源性成分的鑒定方法，采用實時熒光重組酶聚合酶擴增技術，所述鑒定方法包括如下步驟：

S1、制備待測樣品；

S2、從所述待測樣品中提取總DNA；

S3、引物、探針的設計篩選：根據目標動物的基因組DNA序列設計引物和探針；

S4、擴增試劑準備：將步驟S3設計的引物和探針與緩沖溶液、模板DNA、無菌雙蒸水混合，得到混合液，再與凍干重組酶聚合酶混合均勻，其中，所述模板DNA包括：陽性對照組、陰性對照組和空白對照組，陽性對照組用目標動物的基因組DNA作為模板DNA，陰性對照組用其他動物的基因組DNA作為模板DNA，空白對照組用去離子水替代基因組DNA作為模板DNA；

S5、實時熒光重組酶聚合酶擴增：進行實時熒光重組酶聚合酶擴增反應，獲取陽性對照組、陰性對照組和空白對照組的實時熒光強度曲線，驗證所述熒光重組酶聚合酶擴增技術的有效性；

S6、結果鑒定：將待測樣品的總DNA、陽性對照組的模板DNA在相同條件下進行實時熒光重組酶聚合酶擴增反應，得到結果。

本發明提供了一套利用實時熒光重組酶聚合酶擴增技術進行肉制品中動物源性成分鑒定的方法，所述方法是根據目標動物的基因組DNA序列設計引物和探針，再應用設計合成好的引物和探針進行實時熒光重組酶聚合酶擴增，以確定所設計引物和探針的有效性并篩選出較優的引物和探針。然后分別以待測樣品的基因組DNA、陽性對照組的基因組DNA為擴增模板，采用篩選出的引物和探針，在相同條件下進行實時熒光重組酶聚合酶擴增反應，根據待測樣品、陽性對照組的實時熒光強度曲線的走勢得知樣品中是否含有目標動物成分。

在其中一個實施例中，所述目標動物為豬。

在其中一個實施例中，所述目標動物的基因組DNA序列是豬細胞色素b的基因序列。