[發(fā)明專利]血小板衍生生長因子的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611183329.1
• 申請日: 2016-12-20
• 公開（公告）號(hào): CN106770553B
• 公開（公告）日: 2018-11-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 繆鵬;楊大威;王弼陡;孫海旋;唐玉國
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所
• 主分類號(hào): G01N27/30
• 分類號(hào): G01N27/30;G01N27/327
• 代理公司: 北京遠(yuǎn)大卓悅知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11369
• 代理人: 韓飛

本案涉及血小板衍生生長因子的檢測方法，采用電化學(xué)的方法，在金電極表面修飾序列一，然后適配體一通過與序列一的互補(bǔ)配對也結(jié)合至電極表面；然后浸入包含待測樣和適配體二的溶液中，樣本中的血小板衍生生長因子(PDGF?BB)會(huì)與適配體一及適配體二結(jié)合，進(jìn)而將適配體一從電極表面取代下來，此時(shí)電極表面的序列一暴露出的黏性末端將觸發(fā)雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，其產(chǎn)物進(jìn)一步吸附電活性物質(zhì)六銨合釕，產(chǎn)生明顯的電化學(xué)響應(yīng)；通過電化學(xué)工作站讀出差分脈沖伏安信息，經(jīng)分析，其與PDGF?BB濃度在一定的濃度范圍內(nèi)存在線性關(guān)系，檢測限為0.3pg/mL，滿足實(shí)際應(yīng)用所需要的PDGF?BB濃度水平。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種血小板衍生生長因子的檢測方法，尤其涉及一種基于鄰位效應(yīng)的電化學(xué)分析技術(shù)在血小板衍生生長因子檢測上的應(yīng)用。

背景技術(shù)

血小板衍生生長因子(plateler-derived growth factor,PDGF)是血小板分泌的一種主要絲裂原，是一種重要的、作用于間充質(zhì)細(xì)胞的血小板衍生因子。PDGF具有三種形式的二聚體結(jié)構(gòu)，即PDGF-AA，PDGF-BB及PDGF-AB。PDGF-BB可以刺激成骨細(xì)胞的DNA合成和細(xì)胞的分裂復(fù)制，同時(shí)也可以促進(jìn)成骨細(xì)胞合成膠原以及非膠原蛋白。因此，PDGF-BB可促進(jìn)新生血管的形成和骨細(xì)胞的復(fù)制，參與骨折的早期修復(fù)。傳統(tǒng)的PDGF-BB濃度檢測方法是酶聯(lián)免疫吸附法，然而這一方法面臨著許多問題，如成本相對昂貴，靈敏度低，操作復(fù)雜等。近年來，電化學(xué)技術(shù)發(fā)展迅速，具有許多優(yōu)點(diǎn)，如高靈敏度、快速響應(yīng)和低成本。因此本發(fā)明開發(fā)出了一種選擇性和敏感性高的檢測PDGF-BB的新型電化學(xué)檢測方法。

發(fā)明內(nèi)容

針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題，本案提供一種血小板衍生生長因子的檢測方法，采用電化學(xué)的方法，在金電極表面修飾序列一(Initiator)，然后適配體一(aptamer 1)通過與Initiator的互補(bǔ)配對也結(jié)合至電極表面。然后浸入包含待測樣和適配體二(aptamer 2)樣品中，樣本中的PDGF-BB會(huì)與aptamer1及aptamer 2結(jié)合，進(jìn)而將aptamer 1從電極表面取代下來，此時(shí)電極表面的Initiator暴露出的黏性末端將促發(fā)鏈?zhǔn)诫s交反應(yīng)。雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物吸附電活性物質(zhì)六銨合釕，產(chǎn)生明顯的電化學(xué)響應(yīng)。通過電化學(xué)工作站讀出差分脈沖伏安(DPV)信息，經(jīng)分析，其與PDGF-BB濃度在一定的濃度范圍內(nèi)存在線性關(guān)系，檢測限為0.3pg/mL，滿足實(shí)際應(yīng)用所需要的PDGF-BB濃度水平。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本案通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：

一種血小板衍生生長因子的檢測方法，其包括：

1)以金電極作為工作電極，對金電極進(jìn)行預(yù)處理；

2)將序列一修飾于所述金電極表面；

3)將巰基己醇修飾于所述金電極表面，用于對未修飾上序列一的金電極表面進(jìn)行占位；

4)將適配體一修飾到所述金電極上，以使適配體一與序列一互補(bǔ)配對；

5)將所述金電極插入含適配體二的待測液中，以使得適配體一、適配體二和血小板衍生生長因子三者結(jié)合，并將適配體一從電極表面取代下來，從而使金電極表面的序列一暴露出黏性末端；

6)將所述金電極與序列二、序列三和序列四結(jié)合，從而觸發(fā)雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，在金電極表面生成雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物；

7)以六銨合釕作為電活性物質(zhì)，采用差分脈沖伏安法獲得所述雜交鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物吸附六銨合釕后所產(chǎn)生的電化學(xué)響應(yīng)信號(hào)；

8)根據(jù)電化學(xué)響應(yīng)信號(hào)與血小板衍生生長因子濃度的對應(yīng)關(guān)系，獲得待測液中血小板衍生生長因子的濃度；其中，

序列一為ACATACAATAGATCGC-SH；

序列二為GCGATCTATTGTATGTTTTAGCTTATCAGACTGATGTTGA；