[發明專利]血小板衍生生長因子的檢測方法

有效

• 申請號: 201611183329.1
• 申請日: 2016-12-20
• 公開（公告）號: CN106770553B
• 公開（公告）日: 2018-11-30
• 發明（設計）人: 繆鵬;楊大威;王弼陡;孫海旋;唐玉國
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所
• 主分類號: G01N27/30
• 分類號: G01N27/30;G01N27/327
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理事務所(普通合伙) 11369
• 代理人: 韓飛

1.一種血小板衍生生長因子的檢測方法，其特征在于，包括：

1)以金電極作為工作電極，對金電極進行預處理；

2)將序列一修飾于所述金電極表面；

3)將巰基己醇修飾于所述金電極表面，用于對未修飾上序列一的金電極表面進行占位；

4)將適配體一修飾到所述金電極上，以使適配體一與序列一互補配對；

5)將所述金電極插入含適配體二的待測液中，以使得適配體一、適配體二和血小板衍生生長因子三者結合，并將適配體一從電極表面取代下來，從而使金電極表面的序列一暴露出黏性末端；

6)將所述金電極與序列二、序列三和序列四結合，從而觸發雜交鏈式反應，在金電極表面生成雜交鏈式反應產物；

7)以六銨合釕作為電活性物質，采用差分脈沖伏安法獲得所述雜交鏈式反應產物吸附六銨合釕后所產生的電化學響應信號；

8)根據電化學響應信號與血小板衍生生長因子濃度的對應關系，獲得待測液中血小板衍生生長因子的濃度；其中，

序列一為ACATACAATAGATCGC-SH；

序列二為GCGATCTATTGTATGTTTTAGCTTATCAGACTGATGTTGA；

序列三為ATCAGACTGATGTTGATGAAACTCAACATCAGTCTGATAA GCTA；

序列四為GTTTCATCAACATCAGTCTGATTAGCTTATCAGACTGATGTTGA；

適配體一為ACGGCACGTAGAGCATCACCATGATCCTG；

適配體二為CAGGCTACGGCACGTAGAGCATCACCATGATCCTGTTTTTTTTTTTTTTTTTTATACAGATACAATAGATC。

2.如權利要求1所述的血小板衍生生長因子的檢測方法，其特征在于，對金電極進行預處理包括：

將金電極在修飾前浸泡于水虎魚洗液中，以除去電極表面吸附的雜質；其中，以體積比為計，所述水虎魚洗液的組成為98％H₂SO₄∶30％H₂O₂＝3∶1。

3.如權利要求2所述的血小板衍生生長因子的檢測方法，其特征在于，對金電極進行預處理還包括：將金電極分別用碳化硅砂紙和氧化鋁粉末打磨至呈鏡面光滑，隨后將金電極分別在乙醇和蒸餾水中超聲清洗，并最后在50％的HNO₃溶液中浸泡30分鐘。

4.如權利要求3所述的血小板衍生生長因子的檢測方法，其特征在于，對金電極進行預處理還包括：將金電極用0.5M H₂SO₄溶液清洗，隨后用氮氣干燥以待后續的修飾。

5.如權利要求1所述的血小板衍生生長因子的檢測方法，其特征在于，將序列一修飾于所述金電極表面具體包括：將經預處理的金電極與0.5μM的序列一溶液在室溫下反應16小時。

6.如權利要求1所述的血小板衍生生長因子的檢測方法，其特征在于，將巰基己醇修飾于所述金電極表面具體包括：將已修飾有序列一的金電極在1mM巰基己醇溶液中浸泡60分鐘，隨后用雙蒸水徹底沖洗并在氮氣流中干燥待用。

7.如權利要求1所述的血小板衍生生長因子的檢測方法，其特征在于，所述差分脈沖伏安法采用三電極系統，其中，工作電極為金電極，對電極為鉑電極，參比電極為飽和甘汞電極；差分脈沖伏安法所用緩沖液為含有50μM[Ru(NH₃)₆]³⁺的10mM Tris-HCl溶液。