[發明專利]一種Ⅰ群4型禽腺病毒DNA疫苗及其應用

在審

• 申請號: 201611182570.2
• 申請日: 2016-12-20
• 公開（公告）號: CN106729694A
• 公開（公告）日: 2017-05-31
• 發明（設計）人: 唐榮宏;李亞杰;楊保收;付旭彬;梁武
• 申請（專利權）人: 天津瑞普生物技術股份有限公司
• 主分類號: A61K39/235
• 分類號: A61K39/235;A61P1/16;A61P31/20;C12N15/85
• 代理公司: 天津合志慧知識產權代理事務所(普通合伙)12219
• 代理人: 陳松

1.一種Ⅰ群4型禽腺病毒DNA疫苗，其特征在于該疫苗的抗原含有Ⅰ群4型禽腺病毒纖維蛋白C-末端的表達基因。

2.根據權利要求1所述的一種Ⅰ群4型禽腺病毒DNA疫苗，其特征在于所述Ⅰ群4型禽腺病毒纖維蛋白C-末端的表達基因是在其天然表達基因基礎上以雞偏嗜密碼子替換其中的雞稀有密碼子所得的產物。

3.根據權利要求1所述的一種Ⅰ群4型禽腺病毒DNA疫苗，其特征在于所述Ⅰ群4型禽腺病毒纖維蛋白C-末端的表達基因是序列如SEQ ID No.2所示的DNA。

4.根據權利要求1所述的一種Ⅰ群4型禽腺病毒DNA疫苗，其特征在于所述抗原是通過以下方法制備的：

1)分別以SEQ ID No.3、SEQ ID No.4所示的DNA片段為引物，以FAV-4病毒為模板，按照94℃變性45s，56℃退火45s，72℃延伸1min，共進行30循環進行PCR擴增；將PCR產物直接克隆到pMD-18T載體上，即得到重組載體pMD-18T-FAV4C；

2)將FAV-4-C基因的核苷酸序列優化至SEQ ID No.2所示狀態，合成該基因到pMD-18T載體上，即得到重組載體pMD-18T-optiFAV4C；

3)將重組載體pMD-18T-optiFAV4C與pCAGGS用EcoR I和Sma I雙酶切，酶切產物進行1％瓊脂糖凝膠電泳，分別回收目的片段和pCAGGS，然后16℃連接過夜，將連接產物在宿主細胞中擴增。

5.根據權利要求4所述的一種Ⅰ群4型禽腺病毒DNA疫苗，其特征在于所述將連接產物在宿主細胞中擴增，具體包括以下操作：將連接產物轉化到E.coliDH5α感受態細胞，挑取單菌落接種到2ml含100μg/mL氨芐青霉素的LB培養基，37℃振蕩培養12h，提取質粒后用雙酶切進行鑒定，即得到作為抗原的重組質粒pCAGoptiFAV4C。

6.根據權利要求5所述的一種Ⅰ群4型禽腺病毒DNA疫苗，其特征在于步驟3)完成后繼續執行以下步驟4)：使用商品名為Endofree的質粒大提試劑盒對重組質粒pCAGoptiFAV4C進行提取純化。

7.一種權利要求1所述疫苗用于預防雞心包積水肝炎綜合征的應用。