[發(fā)明專利]B30位蘇氨酸缺失人胰島素晶體的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611179991.X
• 申請(qǐng)日: 2016-12-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106749616B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-09-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉海峰;聶洪霞;應(yīng)歡;周祥山;解福生;黃菁;李志;龐甲佩;史兆松
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華潤(rùn)昂德生物藥業(yè)有限公司;華東理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K14/62
• 分類號(hào): C07K14/62;C07K1/30
• 代理公司: 北京思元知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11598
• 代理人: 霍雪梅;余光軍

1.一種B30位蘇氨酸缺失人胰島素晶體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：（1）將B30位蘇氨酸缺失人胰島素溶解，加入有機(jī)溶劑、鋅離子、檸檬酸三鈉和無(wú)機(jī)鹽，得到結(jié)晶液；所述結(jié)晶液中檸檬酸三鈉的濃度為0.025-0.05 M；所述結(jié)晶液中鋅離子與B30位蘇氨酸缺失人胰島素的摩爾比為10-15：1；（2）調(diào)節(jié)結(jié)晶液的pH值，進(jìn)行結(jié)晶，即得；

步驟（1）所述結(jié)晶液中有機(jī)溶劑的體積百分比為10-15%；所述有機(jī)溶劑選自丙酮、乙腈或2-甲基-2,4-戊二醇中的任意一種；

步驟（1）所述結(jié)晶液中無(wú)機(jī)鹽的濃度為0.01-0.05 M；所述無(wú)機(jī)鹽選自氯化鈉、硫酸銨或醋酸銨中的任意一種或兩種；

步驟（1）所述結(jié)晶液中B30位蘇氨酸缺失人胰島素的濃度為3-9 g/L；

步驟（2）所述調(diào)節(jié)結(jié)晶液的pH值包括：先調(diào)節(jié)結(jié)晶液的pH值為7.8-8.0，然后加入有機(jī)酸調(diào)節(jié)pH值為5.8-6.0；

步驟（2）所述結(jié)晶的方式為室溫靜置40-50 min，攪拌3-4 h，然后4℃靜置8-9 h，得到結(jié)晶。

2.按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）所述結(jié)晶液中鋅離子與B30位蘇氨酸缺失人胰島素的摩爾比為10-12：1；

所述鋅離子選自氯化鋅、醋酸鋅或碘化鋅中的任意一種。

3.按照權(quán)利要求2所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）所述結(jié)晶液中鋅離子與B30位蘇氨酸缺失人胰島素的摩爾比為10-11：1。

4.按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）所述結(jié)晶液中無(wú)機(jī)鹽的濃度為0.01-0.03 M。

5.按照權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）所述結(jié)晶液中無(wú)機(jī)鹽的濃度為0.01-0.02 M。

6.按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟（1）所述溶解是用稀酸溶解B30位蘇氨酸缺失人胰島素；其中，所述稀酸的濃度為10-40 mM；所述稀酸選自鹽酸、檸檬酸或醋酸中的任意一種。

7.按照權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述稀酸的濃度為15-30 mM。

8.按照權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述稀酸的濃度為20-25 mM。

9.按照權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述有機(jī)酸為檸檬酸。