[發(fā)明專利]快速誘導(dǎo)繁殖偏穗鵝觀草下胚軸愈傷組織的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611178288.7
• 申請(qǐng)日: 2016-12-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106718910B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李葆春;甘敏;王化俊;孟亞雄;馬小樂(lè);楊軻;汪軍成;任盼榮;姚立蓉;司二靜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責(zé)任公司 62102
• 代理人: 張真

本發(fā)明涉及一種植物愈傷組織誘導(dǎo)及培養(yǎng)的方法，尤其是一種偏穗鵝觀草無(wú)毒條件下種子消毒及快速誘導(dǎo)繁殖其無(wú)菌實(shí)生苗下胚軸愈傷組織的方法。一種快速誘導(dǎo)繁殖偏穗鵝觀草下胚軸愈傷組織的方法，其主要特點(diǎn)在于步驟如下：(1)無(wú)毒條件下無(wú)菌外植體的獲得：(2)愈傷組織誘導(dǎo)：(3)愈傷組織增殖培養(yǎng)：將步驟(2)獲得的顏色黃綠，質(zhì)地疏松的愈傷組織切割成直徑約0.1?0.2cm的小塊，然后轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)愈傷組織增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)25?30d后繼續(xù)轉(zhuǎn)接到新的誘導(dǎo)愈傷組織增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖，最終獲得顏色黃綠，結(jié)構(gòu)致密的優(yōu)良愈傷組織材料。該方法能夠在無(wú)毒條件下進(jìn)行偏穗鵝觀草的種子消毒并且快速誘導(dǎo)出其無(wú)菌實(shí)生苗下胚軸的愈傷組織，經(jīng)過(guò)繼代繁殖后，獲得大量顏色黃綠，結(jié)構(gòu)松脆的優(yōu)良愈傷組織材料，可為偏穗鵝觀草下胚軸組織培養(yǎng)以及細(xì)胞懸浮培養(yǎng)提供技術(shù)支撐。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種植物愈傷組織誘導(dǎo)及培養(yǎng)的方法，尤其是一種偏穗鵝觀草無(wú)毒條件下種子消毒及快速誘導(dǎo)繁殖其無(wú)菌實(shí)生苗下胚軸愈傷組織的方法。

背景技術(shù)

愈傷組織的培養(yǎng)是植物組織培養(yǎng)過(guò)程中的一個(gè)重要階段，愈傷組織是幼嫩的薄壁細(xì)胞，具有潛在的分化能力，可以進(jìn)一步分化形成完整植株，通過(guò)愈傷的培養(yǎng)也可獲得不同性質(zhì)的愈傷組織，可為原生質(zhì)體的分離，融合或遺傳轉(zhuǎn)化提供優(yōu)質(zhì)材料。偏穗鵝觀草(Roegneria komarovii(Nevski)Nevski)為禾本科鵝觀草屬多年生草本植物，原產(chǎn)于中國(guó)，除新疆、青海、西藏外，分布遍及全國(guó)。多生長(zhǎng)在海拔100-2300米的山坡和濕潤(rùn)草地。此種植物可作牲畜的飼料，葉質(zhì)柔軟而繁盛，產(chǎn)草量大，可食性高。目前對(duì)無(wú)毒條件下進(jìn)行種子消毒并快速誘導(dǎo)偏穗鵝觀草無(wú)菌實(shí)生苗下胚軸愈傷組織的相關(guān)報(bào)道還比較少。當(dāng)前急需一種以無(wú)升汞處理偏穗鵝觀草種子并以其無(wú)菌苗下胚軸為外植體誘導(dǎo)愈傷從而使其增殖的方法，通過(guò)人工控制環(huán)境條件來(lái)產(chǎn)生大量的愈傷組織，并進(jìn)一步培養(yǎng)使其增殖，為偏穗鵝觀草與小麥體細(xì)胞雜交做準(zhǔn)備，從而將其優(yōu)良性狀導(dǎo)入小麥，以期為小麥遺傳育種及研究提供中間材料。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于避免現(xiàn)有技術(shù)的不足之處而提供一種快速誘導(dǎo)繁殖偏穗鵝觀草無(wú)菌實(shí)生苗下胚軸愈傷組織的方法，該方法簡(jiǎn)單易行，能夠高效快速的獲得大量偏穗鵝觀草下胚軸愈傷組織。

以無(wú)菌培養(yǎng)獲得的偏穗鵝觀草下胚軸為外植體，誘導(dǎo)愈傷組織發(fā)生，然后繼代培養(yǎng)，使其增殖。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為一種快速誘導(dǎo)繁殖偏穗鵝觀草下胚軸愈傷組織的方法，其主要特點(diǎn)在于步驟如下：

(1)無(wú)毒條件下無(wú)菌外植體的獲得：將偏穗鵝觀草種子置于50％～55％的濃硫酸中,在條件為28℃～30℃，210r/min～220r/min的搖床里振蕩0.9～1.2小時(shí)做脫皮催芽處理，之后用蒸餾水洗去濃硫酸并置于超凈工作臺(tái)，首先用無(wú)菌水清洗種子，然后用75％的酒精振蕩沖洗2.5～3.5min，緊接著用無(wú)菌水將種子表面的酒精清洗干凈，再用20％～25％的次氯酸鈉振蕩沖洗14～16min,最后用無(wú)菌水將種子表面的次氯酸鈉清洗干凈，獲得偏穗鵝觀草無(wú)菌種子，將滅菌后的種子放置于培養(yǎng)無(wú)菌實(shí)生苗的培養(yǎng)基中培養(yǎng)10-15d，獲得無(wú)菌實(shí)生苗的下胚軸幼嫩部分作為誘導(dǎo)愈傷的外植體；

(2)愈傷組織誘導(dǎo)：將步驟(1)獲得的無(wú)菌實(shí)生苗下胚軸橫切為約0.3-0.5cm長(zhǎng)的小段作為誘導(dǎo)愈傷的材料，接種于誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基上培養(yǎng)25-30d，誘導(dǎo)愈傷發(fā)生；

(3)愈傷組織增殖培養(yǎng)：將步驟(2)獲得的顏色黃綠，質(zhì)地疏松的愈傷組織切割成直徑為0.1-0.2cm的小塊，然后轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)愈傷組織增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)25-30d后繼續(xù)轉(zhuǎn)接到新的誘導(dǎo)愈傷組織增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖，最終獲得顏色黃綠，結(jié)構(gòu)致密的優(yōu)良愈傷組織材料。