[發(fā)明專利]快速誘導(dǎo)繁殖偏穗鵝觀草下胚軸愈傷組織的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201611178288.7
• 申請日: 2016-12-19
• 公開（公告）號: CN106718910B
• 公開（公告）日: 2019-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李葆春;甘敏;王化俊;孟亞雄;馬小樂;楊軻;汪軍成;任盼榮;姚立蓉;司二靜
• 申請（專利權(quán)）人: 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 蘭州振華專利代理有限責(zé)任公司 62102
• 代理人: 張真

1.一種快速誘導(dǎo)繁殖偏穗鵝觀草下胚軸愈傷組織的方法，其特征在于步驟如下：

（1）無毒條件下無菌外植體的獲得：將偏穗鵝觀草種子置于50%~55%的濃硫酸中,在條件為28℃~30℃，210 r/min~220 r/min的搖床里振蕩0.9~1.2小時做脫皮催芽處理，之后用蒸餾水洗去濃硫酸并置于超凈工作臺，首先用無菌水清洗種子，然后用75%的酒精振蕩沖洗2.5~3.5min，緊接著用無菌水將種子表面的酒精清洗干凈，再用20%~25%的次氯酸鈉振蕩沖洗14~16min,最后用無菌水將種子表面的次氯酸鈉清洗干凈，獲得偏穗鵝觀草無菌種子，將滅菌后的種子放置于培養(yǎng)無菌實(shí)生苗的培養(yǎng)基中培養(yǎng)10-15 d，獲得無菌實(shí)生苗的下胚軸幼嫩部分作為誘導(dǎo)愈傷的外植體；

（2）愈傷組織誘導(dǎo)：將步驟（1）獲得的無菌實(shí)生苗下胚軸橫切為0.3-0.5cm長的小段作為誘導(dǎo)愈傷的材料，接種于誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基上培養(yǎng)25-30d，誘導(dǎo)愈傷發(fā)生；

（3）愈傷組織增殖培養(yǎng)：將步驟（2）獲得的顏色黃綠，質(zhì)地疏松的愈傷組織切割成直徑為0.1-0.2cm的小塊，然后轉(zhuǎn)接到誘導(dǎo)愈傷組織增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)25-30d后繼續(xù)轉(zhuǎn)接到新的誘導(dǎo)愈傷組織增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖，最終獲得顏色黃綠，結(jié)構(gòu)致密的優(yōu)良愈傷組織材料；

所述步驟（1）中所述的培養(yǎng)無菌實(shí)生苗的培養(yǎng)基為MS營養(yǎng)液、5-7 g/L瓊脂、20-30g/L蔗糖、0.05-0.1g/L肌醇組成，pH=5.7-5.8；步驟（2）中所述的誘導(dǎo)愈傷組織培養(yǎng)基、步驟（3）中所述的誘導(dǎo)愈傷組織增殖培養(yǎng)基均為MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基，其配比為：3.0-5.0 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸， 5-7 g/L 瓊脂，20-30g/L蔗糖，0.05-0.1g/L肌醇組成，pH=5.7-5.8。

2.如權(quán)利要求1所述的快速誘導(dǎo)繁殖偏穗鵝觀草下胚軸愈傷組織的方法，其特征在于：所述的步驟（1）中偏穗鵝觀草發(fā)芽階段需暗培養(yǎng)，發(fā)芽以后階段及步驟（2）、（3）的下胚軸愈傷誘導(dǎo)和愈傷增殖均在連續(xù)光照培養(yǎng)，光照強(qiáng)度在1500-2000 lx之間，濕度60-70%的環(huán)境下進(jìn)行。

3.如權(quán)利要求1所述的快速誘導(dǎo)繁殖偏穗鵝觀草下胚軸愈傷組織的方法，其特征在于還包括有步驟（3）所述的產(chǎn)生的愈傷組織材料，通過稱量法測定愈傷組織的生長量,其具體步驟為：

1)將盛有MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基的錐形瓶放在天平上進(jìn)行稱量，得到數(shù)值a;

2)將1）中稱量過的錐形瓶放入超凈工作臺中進(jìn)行愈傷組織的轉(zhuǎn)接，轉(zhuǎn)接結(jié)束后對錐形瓶進(jìn)行稱量，得到數(shù)值b;

3)將轉(zhuǎn)接后的愈傷組織培養(yǎng)30天后再次對錐形瓶進(jìn)行稱量，得到數(shù)值c;

4)愈傷組織的生長量為：c-(b-a)。