[發明專利]一種同時分離和測定唾液中多種酚類物質的方法

有效

• 申請號: 201611177616.1
• 申請日: 2016-12-19
• 公開（公告）號: CN106770760B
• 公開（公告）日: 2018-08-21
• 發明（設計）人: 司曉喜;劉志華;張鳳梅;朱瑞芝;朱琴;楊光宇;何沛;劉春波;申欽鵬;尤俊衡;王昆淼;王晉
• 申請（專利權）人: 云南中煙工業有限責任公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 金耀生;于洪

本發明涉及一種分離和測定唾液中多種酚類物質的方法，屬于分析化學技術領域，本發明采用唾液收集管收集唾液樣品，采集完后經高速離心后取上清液，然后依次經酸化、加入內標，后渦旋振蕩至混勻，接著過微孔濾膜，濾液采用超高效液相色譜?多波長熒光法分離和測定唾液中多種酚類物質，制作標準曲線，內標法定量。本發明方法可以有效的用于分離和測定唾液中多種酚類物質，方法分離效果好，檢出限低，精密度好，準確可靠，具有推廣應用價值。

技術領域

本發明屬于分析化學技術領域，具體涉及一種同時分離和測定唾液中多種酚類物質的方法。

背景技術

苯酚、苯二酚、甲基苯酚等，它們不但有較難聞的氣味，還對皮膚及呼吸道黏膜有強烈的刺激作用和致癌作用。另一些酚類，如丁香酚、2-甲氧基-4-甲基-苯酚，有強烈的香氣，是香精中的重要配方之一。這些酚類物質大量存在于卷煙主流煙氣中，可通過煙草吸食者、被動吸煙者的唾液溶解吸收，進而對人體產生影響。此外，大量暴露于酚類物質的人體唾液中可能存在酚類，大量吸入酚類物質而引發的酚類物質中毒者唾液中也可能存在酚類物質。因此研究測定人體唾液中吸收溶解的酚類成分，不僅可為吸煙與健康的評估提供數據支持，還可用于評價酚類物質的人體暴露量，或者用于檢測酚類中毒。

目前，測定不同基質、樣品中酚類物質已有大量報道，然而唾液樣品中多種酚類物質的測定還未見報道。酚類物質常用的測定方法有氣相色譜-質譜聯用法、高效液相色譜法。但采用氣相色譜-質譜聯用法測定酚類物質易氧化或受熱分解，通常需要進行衍生化處理，操作十分繁瑣，影響測定結果的準確性。采用常規的高效液相色譜法測定時，同時測定的目標物少，分離時間長，且前處理過程繁瑣。因此，開發簡單快速、分離效果好、高通量、高靈敏度、定量準確的唾液中多種酚類物質的分離和測定方法非常迫切。

發明內容

本發明的目的在于針對目前唾液中多種酚類物質分離和測定的方法未見文獻報道的現狀，以及現有技術的不足，提供一種同時分離和測定唾液中多種酚類物質的方法，該方法分離效果好，檢出限低，精密度好，準確可靠，具有推廣應用價值，基于實現上述目的，本發明采用的技術方案如下：

一種同時分離和測定唾液中多種酚類物質的方法，包括以下步驟：

步驟(1)，樣品采集：將唾液收集管中的棉棒放于口中，咀嚼后放回收集管，經離心后，得到唾液樣品；所述的咀嚼時間為1-3min；

步驟(2)，樣品酸化：移取唾液樣品于樣品管中，依次加入酸化劑、內標物，然后經渦旋振蕩至混合均勻，得到酸化液；

所述的酸化劑為乙酸，所述的酸化劑用量為唾液體積的0.5％-2％；

所述的內標物為4-氟苯酚，濃度為0.1-10mg/L；

步驟(3)，測定：將步驟(2)得到的酸化液，過0.22μm微孔濾膜，采用超高效液相色譜-多波長熒光法分離和測定唾液中的多種酚類物質，內標法定量，根據標準曲線計算各酚類物質的含量；

所述的多種酚類物質包括對苯二酚、間苯二酚、鄰甲基對苯二酚、鄰苯二酚、苯酚、4-甲基苯酚、2-甲基苯酚、2-甲氧基-4-甲基-苯酚、2,6-二甲基苯酚、2-乙基苯酚和丁香酚；

所述超高效色譜條件如下：

色譜柱：C18反相色譜柱或等效柱，C18反相色譜柱的規格為長度×內徑是100mm×2.1mm，粒徑為1.7μm；流速為0.1-0.4mL/min；柱溫為30-60℃；進樣量為1-3μL；流動相A為體積濃度為0.5-2％的乙酸水溶液，流動相B為乙酸、乙腈和水的混合溶液，流動相B乙酸濃度與流動相A中乙酸濃度相同，乙腈體積濃度為25-50％，梯度洗脫；

梯度洗脫條件為：第0min，流動相A 70-95％，流動相B 30-5％；第6-12min任意一時刻改變流動相濃度配比，改變后的流動相A為0％，流動相B為100％；第15min停止洗脫；具體見下表1：