[發(fā)明專利]一種同時(shí)分離和測(cè)定唾液中多種酚類物質(zhì)的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611177616.1
• 申請(qǐng)日: 2016-12-19
• 公開（公告）號(hào): CN106770760B
• 公開（公告）日: 2018-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 司曉喜;劉志華;張鳳梅;朱瑞芝;朱琴;楊光宇;何沛;劉春波;申欽鵬;尤俊衡;王昆淼;王晉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02
• 代理公司: 昆明正原專利商標(biāo)代理有限公司 53100
• 代理人: 金耀生;于洪

1.一種同時(shí)分離和測(cè)定唾液中多種酚類物質(zhì)的方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟（1），樣品采集：將唾液收集管中的棉棒放于口中，咀嚼后放回收集管，經(jīng)離心后，得到唾液樣品；所述的咀嚼時(shí)間為1-3 min；

步驟（2），樣品酸化：移取唾液樣品于樣品管中，依次加入酸化劑、內(nèi)標(biāo)物，然后經(jīng)渦旋振蕩至混合均勻，得到酸化液；

所述的酸化劑為乙酸，所述的酸化劑用量為唾液體積的0.5%-2%；

所述的內(nèi)標(biāo)物為4-氟苯酚，濃度為0.1-10mg/L；

步驟（3），測(cè)定：將步驟（2）得到的酸化液，過(guò)0.22 μm微孔濾膜，采用超高效液相色譜-多波長(zhǎng)熒光法分離和測(cè)定唾液中的多種酚類物質(zhì)，內(nèi)標(biāo)法定量，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各酚類物質(zhì)的含量；

所述的多種酚類物質(zhì)包括對(duì)苯二酚、間苯二酚、鄰甲基對(duì)苯二酚、鄰苯二酚、苯酚、4-甲基苯酚、2-甲基苯酚、2-甲氧基-4-甲基-苯酚、2,6-二甲基苯酚、2-乙基苯酚和丁香酚；

所述超高效色譜條件如下：

色譜柱：C18反相色譜柱，C18反相色譜柱的規(guī)格為長(zhǎng)度×內(nèi)徑是100 mm× 2.1 mm，粒徑為1.7 μm；流速為0.1-0.4 mL/min；柱溫為30-60℃；進(jìn)樣量為1-3 μL；流動(dòng)相A為體積濃度為0.5-2%的乙酸水溶液，流動(dòng)相B為乙酸、乙腈和水的混合溶液，流動(dòng)相B乙酸濃度與流動(dòng)相A中乙酸濃度相同，乙腈體積濃度為25-50%，梯度洗脫；

梯度洗脫條件為：第0min，流動(dòng)相A 70-95%，流動(dòng)相B 30-5%；第6-12min任意一時(shí)刻改變流動(dòng)相濃度配比，改變后的流動(dòng)相A為 0%，流動(dòng)相B 為100%；第15min停止洗脫；

所述多波長(zhǎng)熒光法的熒光檢測(cè)器的波長(zhǎng)選擇見下表：

。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)分離和測(cè)定唾液中多種酚類物質(zhì)的方法，其特征在于：步驟（1）中唾液離心轉(zhuǎn)速不低于10000 rpm，離心時(shí)間不少于10 min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)分離和測(cè)定唾液中多種酚類物質(zhì)的方法，其特征在于：步驟（2）中唾液移取量為0.5-5 mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的同時(shí)分離和測(cè)定唾液中多種酚類物質(zhì)的方法，其特征在于：步驟（2）中渦旋振蕩轉(zhuǎn)速為500-20000 rpm，渦旋振蕩時(shí)間為0.5-10 min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任意一項(xiàng)所述的同時(shí)分離和測(cè)定唾液中多種酚類物質(zhì)的方法，其特征在于：步驟（3）中標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法如下：配制多種酚類物質(zhì)的5級(jí)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度分別為0.05 mg/L、0.5 mg/L、2.5 mg/L、10 mg/L、25 mg/L，5級(jí)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液中均加入內(nèi)標(biāo)物，內(nèi)標(biāo)物濃度與唾液樣品中加入內(nèi)標(biāo)濃度相同，內(nèi)標(biāo)物濃度為0.1-10mg/L，對(duì)5級(jí)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行超高效液相色譜-多波長(zhǎng)熒光法分析，根據(jù)各酚類物質(zhì)響應(yīng)峰面積與內(nèi)標(biāo)物響應(yīng)峰面積的比值為縱坐標(biāo)，以各酚類物質(zhì)濃度與內(nèi)標(biāo)物濃度比值為橫坐標(biāo)，作各酚類物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。