[發(fā)明專(zhuān)利]布魯氏菌病CF-ELISA抗體檢測(cè)試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611177517.3
• 申請(qǐng)日: 2016-12-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106596958B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛開(kāi)榮;張金亞;王楠;徐磊;王苗苗;丁家波;蔣玉文;朱良全;程君生;蔣卉;蔣菲
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/577
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 北京世譽(yù)鑫誠(chéng)專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙) 11368
• 代理人: 張海燕

本發(fā)明涉及一種布魯氏菌病補(bǔ)體結(jié)合酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(CF?ELISA)診斷試劑盒，本試劑盒將補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)中的反應(yīng)系統(tǒng)與酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)中的酶標(biāo)記放大系統(tǒng)相結(jié)合。本試劑盒較傳統(tǒng)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)診斷試劑而言，具有敏感性高、使用簡(jiǎn)便、快速、高通量，標(biāo)準(zhǔn)化程度高的特點(diǎn)，而較傳統(tǒng)ELISA診斷試劑盒而言，具有特異性高、可檢測(cè)各種布病特異性抗體的特點(diǎn)，是一種較為理想的新型布病診斷工具。本試劑盒主要組份：脂多糖LPS抗原包被板、強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照血清、弱陽(yáng)性對(duì)照血清、陰性對(duì)照血清、豚鼠補(bǔ)體、酶標(biāo)記豚鼠補(bǔ)體C1q?B單克隆抗體60G4、底物顯色液、終止液、洗滌液。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及檢測(cè)用生物制品領(lǐng)域，具體是涉及布魯氏菌病補(bǔ)體結(jié)合試-酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(CF-ELISA)抗體檢測(cè)試劑盒，是一種新型布魯氏菌病診斷制品。

背景技術(shù)

布魯氏菌病(布病Brucellosis)是由布魯氏菌或稱(chēng)布魯氏菌(Brucella)引起的以流產(chǎn)和發(fā)熱為特征的人獸共患傳染病。布病在世界存在已有久遠(yuǎn)的歷史，人類(lèi)對(duì)該病的研究認(rèn)識(shí)逐步加深，診斷水平不斷提高，隨著布病診斷技術(shù)不斷發(fā)展，布病血清學(xué)的檢測(cè)方法不斷改進(jìn)和提高。平板凝集試驗(yàn)(PT)、試管凝集試驗(yàn)(SAT)等傳統(tǒng)的診斷技術(shù)，逐漸被敏感性高、特異性強(qiáng)的虎紅平板凝集試驗(yàn)(RBPT)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)、間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(iELISA)、競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(cELISA)、熒光偏振試驗(yàn)(FPA)等新檢測(cè)技術(shù)所取代。當(dāng)前，國(guó)際貿(mào)易指定的牛、羊、豬布病血清學(xué)檢測(cè)方法有RBPT、CFT、iELISA、cELISA、FPA。

在布病血清學(xué)檢測(cè)技術(shù)中，CFT被一致認(rèn)為在特異性上優(yōu)于其他方法，常被用來(lái)對(duì)虎紅平板凝集試驗(yàn)等初篩試驗(yàn)檢測(cè)為陽(yáng)性或可疑的樣品進(jìn)行確診。有研究報(bào)道稱(chēng)，補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)的高特異性處決于其抗原抗體反應(yīng)具有高特異性時(shí)，才能使得反應(yīng)抗體暴露補(bǔ)體結(jié)合位點(diǎn)，引發(fā)補(bǔ)體結(jié)合，而凝集類(lèi)試驗(yàn)、ELISA等在抗原抗體結(jié)合位點(diǎn)部分類(lèi)似情況下，也可能出現(xiàn)結(jié)合而導(dǎo)致假陽(yáng)性的發(fā)生。但傳統(tǒng)布病補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中，需使用新鮮采集的綿羊紅細(xì)胞，補(bǔ)體需在檢測(cè)當(dāng)天進(jìn)行嚴(yán)格定量，因而，綿羊紅細(xì)胞與補(bǔ)體等試劑的定量準(zhǔn)確性對(duì)結(jié)果影響很大，而這些試劑的需在檢測(cè)現(xiàn)場(chǎng)定量，對(duì)試劑的標(biāo)準(zhǔn)化產(chǎn)生很大影響。再加上敏感性不太高，操作繁瑣，難以在臨床上普遍使用。

ELISA是一種操作方便，靈敏度高，特異性也較好的布病診斷技術(shù)，并且具有高通量檢測(cè)的特點(diǎn)。目前，用于布病檢測(cè)有間接ELISA(iELISA)和競(jìng)爭(zhēng)ELISA(cELISA)兩種ELISA技術(shù)。其中iELISA可以作為動(dòng)物群體檢測(cè)的篩選試驗(yàn)使用，cELISA可以作為動(dòng)物個(gè)體檢測(cè)的確診試驗(yàn)使用。牛的布病ELISA檢測(cè)方法已是國(guó)際貿(mào)易中指定的檢測(cè)方法之一，其他種動(dòng)物布病的ELISA檢測(cè)方法也是研究的熱點(diǎn)。但ELISA檢測(cè)方法中，使用的酶標(biāo)記二抗只檢測(cè)IgG類(lèi)布病抗體，對(duì)IgM等類(lèi)型的布病抗體存在漏檢。

CF-ELISA是一種在ELISA板孔中以酶顯色技術(shù)顯示抗原抗體特異性反應(yīng)結(jié)果的補(bǔ)體結(jié)合類(lèi)試驗(yàn)，CF-ELISA即具有CFT的高特異性?xún)?yōu)點(diǎn)，又具有ELISA高敏感性的優(yōu)點(diǎn)，與傳統(tǒng)補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)相比，靈敏度高，操作方便，具有高通量檢測(cè)的特點(diǎn)。

本發(fā)明采用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)原理，結(jié)合以酶標(biāo)記放大技術(shù)，提供了一種新型的布魯氏菌病抗體檢測(cè)試劑盒。本發(fā)明用純化的布魯氏菌LPS作為ELISA板的包被抗原，用以捕捉血清中布魯氏菌病抗體，再通過(guò)加入豚鼠補(bǔ)體構(gòu)成一種抗原、抗體與補(bǔ)體3者相互反應(yīng)結(jié)合的補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)系統(tǒng)，通過(guò)HRP標(biāo)記的豚鼠補(bǔ)體C1q-B 60G4單抗及酶顯色底物等作為補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)的指示系統(tǒng)，建立了一種基于補(bǔ)體結(jié)合類(lèi)反應(yīng)的布魯氏菌病抗體檢測(cè)試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供用于一種新型的基于補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)原理的布魯氏菌病抗體檢測(cè)試劑盒。