[發(fā)明專(zhuān)利]布魯氏菌病CF-ELISA抗體檢測(cè)試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201611177517.3
• 申請(qǐng)日: 2016-12-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN106596958B
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 毛開(kāi)榮;張金亞;王楠;徐磊;王苗苗;丁家波;蔣玉文;朱良全;程君生;蔣卉;蔣菲
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/577
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/577;G01N33/569
• 代理公司: 北京世譽(yù)鑫誠(chéng)專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙) 11368
• 代理人: 張海燕

1.一種布魯氏菌病抗體檢測(cè)試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含布脂多糖LPS抗原包被板、豚鼠補(bǔ)體、酶標(biāo)記的豚鼠補(bǔ)體C1q-B單克隆抗體60G4，所述豚鼠補(bǔ)體C1q-B單克隆抗體60G4是由豚鼠補(bǔ)體C1q-b單抗60G4細(xì)胞株制備的，所述60G4細(xì)胞株已于2015年9月8日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC N0.11186；

所述抗原包被板的抗原是由布魯氏菌S2菌株提取純化的脂多糖LPS，所述布魯氏菌S2菌株于2015年9月8日保藏中國(guó)獸醫(yī)微生物菌種保藏中心，保藏編號(hào)為CVCC70512；

所述試劑盒還包括強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照血清、弱陽(yáng)性對(duì)照血清、陰性對(duì)照血清、底物顯色液、終止液、洗滌液；

所述底物顯色液為雙組份TMB，所述終止液為稀硫酸，所述洗滌液為20倍濃縮的PBS-Tween洗滌液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述酶標(biāo)記的補(bǔ)體C1q-B單克隆抗體60G4中的酶為辣根過(guò)氧化物酶HRP。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于，所述豚鼠補(bǔ)體C1q-B單克隆抗體60G4腹水效價(jià)≥1:200，OD_450nm值≥2.00。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于，所述豚鼠補(bǔ)體效價(jià)為1:15倍稀釋?zhuān)琌D_450nm值≥1.00。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于，所述強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照血清濃度為50IU/ml，所述弱陽(yáng)性對(duì)照血清濃度為25IU/ml。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于，所述抗原包被板的包被方法為：

布魯氏菌S2株LPS抗原用0.05mo1/L碳酸鹽緩沖液稀釋?zhuān)尤氲矫笜?biāo)板，每孔100μl，2～8℃包被18小時(shí)以上，棄去孔中的抗原包被液，加入0.01mo1/L磷酸鹽-吐溫緩沖液洗滌酶標(biāo)板4次，棄去洗滌液，用3％BSA或其它ELISA用封閉劑200μL/孔在2～8℃封閉18小時(shí)以上，用0.01mo1/L磷酸鹽-吐溫緩沖液洗板4次，棄去洗滌液后37℃干燥2h，加干燥劑一起放入錫箔袋中，抽真空密封。

7.權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的試劑盒的使用方法，其特征在于，在抗原包被板上加入被檢測(cè)的動(dòng)物血清樣品和對(duì)照血清，再加入豚鼠補(bǔ)體進(jìn)行補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)，然后加入酶標(biāo)記的豚鼠補(bǔ)體C1q-B單克隆抗體，再加入底物顯色液進(jìn)行顯色，加入終止液后測(cè)定OD值。