[發明專利]體外定量測定vWF-CP酶活性的方法、檢測試劑盒及制備方法

有效

• 申請號: 201611176211.6
• 申請日: 2016-12-19
• 公開（公告）號: CN106596936B
• 公開（公告）日: 2019-05-31
• 發明（設計）人: 林毅然;王季武;黃海燕
• 申請（專利權）人: 吳江華藥生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/573
• 分類號: G01N33/573;G01N33/558;G01N33/536
• 代理公司: 無錫互維知識產權代理有限公司 32236
• 代理人: 龐聰雅

1.一種體外定量測定vWF-CP酶活性的非疾病診斷和治療的方法，其特征在于：包括以下步驟：

S1、試紙條制備：將樣品墊、金標墊、NC膜、吸水墊依次組裝，所述NC膜上設置有檢測線和質控線，所述金標墊、檢測線和質控線上分別包被有金標抗體、T線抗體和C線抗體；

S2、反應液制備：將標準品1、標準品2、待測樣品分別與vWF-CP底物混合反應一段時間后終止反應；

S3、顯色反應：將各反應液分別加入至試紙條的樣品墊，一段時間后掃描各試紙條的檢測線讀數值；

S4、酶活性計算：將待測樣品顯色反應后的檢測線讀數值與標準品1和標準品2顯色反應后的檢測線讀數值進行比較，計算得到待測樣品中vWF-CP酶活性；

其中，所述金標抗體為膠體金標記的抗vWF-CP底物抗體，所述T線抗體為抗vWF-CP底物抗體，所述C線抗體為抗金標抗體抗體，所述金標抗體與T線抗體結合vWF-CP底物上不同的位點；

所述標準品1和標準品2分別為高vWF-CP酶相對活性和低vWF-CP酶相對活性的制品；

所述vWF-CP底物包括vWF功能區氨基酸序列，并在vWF功能區氨基酸序列的N端和C端分別結合有HIS標簽氨基酸序列和FLAG標簽氨基酸序列，所述vWF功能區氨基酸序列為vWF73，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述vWF-CP底物的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2.根據權利要求1所述的體外定量測定vWF-CP酶活性的非疾病診斷和治療的方法，其特征在于：所述標準品1和標準品2為vWF-CP酶相對活性分別為0％和100％的制品。

3.根據權利要求1所述的體外定量測定vWF-CP酶活性的非疾病診斷和治療的方法，其特征在于：所述T線抗體為抗FLAG標簽鼠單克隆抗體，所述C線抗體為二抗羊抗鼠IgG，所述金標抗體為膠體金標記抗HIS標簽鼠單克隆抗體。

4.根據權利要求1所述的體外定量測定vWF-CP酶活性的非疾病診斷和治療的方法，其特征在于：所述步驟S4中酶活性按下列公式進行計算：

5.一種體外定量測定vWF-CP酶活性的檢測試劑盒，其特征在于：包括試紙條、標準品1、標準品2、vWF-CP底物、工作液和終止液，其中，

所述試紙條包括依次組裝的樣品墊、金標墊、NC膜、吸水墊，所述NC膜上設置有檢測線和質控線，所述金標墊、檢測線和質控線上分別包被有金標抗體、T線抗體和C線抗體，所述金標抗體為膠體金標記的抗vWF-CP底物抗體，所述T線抗體為抗vWF-CP底物抗體，所述C線抗體為抗金標抗體抗體，所述金標抗體與T線抗體結合vWF-CP底物上不同的位點；

所述標準品1和標準品2分別為高vWF-CP酶相對活性和低vWF-CP酶相對活性的制品；

所述工作液為含二價金屬離子的緩沖液，所述終止液為含能絡合二價金屬離子的緩沖液；

所述vWF-CP底物包括vWF功能區氨基酸序列，并在vWF功能區氨基酸序列的N端和C端分別結合有HIS標簽氨基酸序列和FLAG標簽氨基酸序列，所述vWF功能區氨基酸序列為vWF73、其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述vWF-CP底物的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

6.根據權利要求5所述的體外定量測定vWF-CP酶活性的檢測試劑盒，其特征在于：所述標準品1和標準品2為vWF-CP酶相對活性分別為0％和100％的制品。

7.根據權利要求5所述的體外定量測定vWF-CP酶活性的檢測試劑盒，其特征在于：所述T線抗體為抗FLAG標簽鼠單克隆抗體，所述C線抗體為二抗羊抗鼠IgG，所述金標抗體為膠體金標記抗HIS標簽鼠單克隆抗體。