[發明專利]一種煙草花葉病毒屬病毒通用檢測引物及其方法

有效

• 申請號: 201611174200.4
• 申請日: 2016-12-19
• 公開（公告）號: CN107058611B
• 公開（公告）日: 2020-02-04
• 發明（設計）人: 李凡;李月月;譚冠林;肖龍;馬龑;熊鋒;蘭平秀;陳小姣;何英云;譚松濤
• 申請（專利權）人: 云南農業大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12R1/94
• 代理公司: 11453 北京名華博信知識產權代理有限公司
• 代理人: 李中強

本發明屬于分子生物學和病毒學技術領域，具體涉及一種煙草花葉病毒屬病毒通用檢測引物及其方法；所述的煙草花葉病毒屬病毒通用檢測引物對序列為：正向引物TobamodF：5’?TKGAYGGNGTBCCNGGNTGYGG?3’，反向引物TobamodR：5’?ACNGAVTBNABCTGTAATTGCTAT?3’；本發明中的檢測引物是基于煙草花葉病毒屬中的32種病毒基因組保守區序列進行設計，用該屬中的7種病毒對該對引物進行擴增效果驗證，擴增效果均較好；從而建立了一種能夠檢測至少7種煙草花葉病毒屬病毒的通用檢測引物及方法，且具有檢測效率高、靈敏度高、成本低的特點。

技術領域

本發明屬于分子生物學和病毒學技術領域，具體涉及一種煙草花葉病毒屬病毒通用檢測引物及其方法。

背景技術

煙草花葉病毒屬(Tobamovirus)是帚狀病毒科(Virgaviridae)中病毒種類最多的一個屬，根據2012年發布的國際病毒分類委員會(ICTV)第九次大會報告，Tobamovirus有25個確定種和6個暫定種，其代表種為TMV。而根據ICTV最新的在線報告顯示，Tobamovirus已有35種病毒(http://www.ictvonline.org/virusTaxonomy.asp)。煙草花葉病毒屬病毒在世界各地均有分布，能侵染茄科、十字花科、葫蘆科等重要作物并引起嚴重危害，是最具經濟重要性的病毒屬之一。

目前為止，植物病毒中已有Potyvirus、Begomovirus、Luteovirus等病毒屬的通用檢測引物，大大提高了這些病毒的檢測效率。煙草花葉病毒屬病毒種類多且侵染性強，尤其是在茄科作物上發病嚴重，但迄今沒有該屬病毒的通用檢測引物，用單一的特異性檢測引物檢測疑似病毒的侵染，工作量大、成本高且繁瑣。為此，建立煙草花葉病毒屬病毒(tobamoviruses)快速、簡便、靈敏的檢測技術很有必要，將對調查分析tobamoviruses的發生、分布，為煙草花葉病毒屬病毒種類的鑒定以及病害防控等提供技術支撐。

發明內容

為了克服背景技術中存在的不足，本發明提出一種煙草花葉病毒屬病毒通用檢測引物及其方法，本發明檢測方法簡單，檢測結果快速，靈敏度高。

本發明是通過如下技術方案實現的：

一種煙草花葉病毒屬病毒通用檢測引物序列為：

正向引物TobamodF：5’-TKGAYGGNGTBCCNGGNTGYGG-3’，

反向引物TobamodR：5’-ACNGAVTBNABCTGTAATTGCTAT-3’；

進一步，所述引物對TMGMV擴增出871bp的產物，對PMMoV擴增出877bp的產物，對TMV、ToMV、ToMMV擴增出880bp的產物，對ORSV擴增出889bp的產物，對CGMMV擴增出874bp的產物。

進一步，所述引物中N可以是A、C、G、T四種堿基中的任意一種，K為G和T中的一種，Y為C和T中的一種，B為C、G、T中的一種，V為A、C、G中的一種。