[發明專利]一種運用高效液相色譜法測定氨糖含量的方法

有效

• 申請號: 201611167428.0
• 申請日: 2016-12-16
• 公開（公告）號: CN106706782B
• 公開（公告）日: 2019-02-26
• 發明（設計）人: 徐小明;夏旭東;包亞君;張沛霞;陳建梅
• 申請（專利權）人: 江蘇艾蘭得營養品有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 靖江市靖泰專利事務所 32219
• 代理人: 陸平

1.一種運用高效液相色譜法測定氨糖含量的方法，其特征在于，其包括以下步驟：

步驟一，對照品溶液的配制；

步驟二，樣品處理；

步驟三，確定液相色譜條件；

所述，步驟一包括以下步驟：

采用USP 標準品作為氨糖對照品，精密稱定適量的D-氨基葡萄糖鹽酸鹽對 照品置一容量瓶中，加入醋酸鈉溶液，超聲溶解；

用醋酸鈉溶液稀釋至刻度，混勻作為標準儲備液；吸取適量標準儲備液至另 一容量瓶中，加異硫氰酸苯酯，再加甲醇，超聲溶解，加甲醇/水至刻度，混勻，水浴中加熱， 冷卻至室溫；

轉移上述溶液適量至離心管中，加入庚烷，振搖，將甲醇層轉移至HPLC瓶中， 進樣；

所述，步驟二包括以下步驟：

精密稱取一定量的供試品置一容量瓶中，加入適量醋酸鈉溶液，超聲溶解；

用醋酸鈉溶液稀釋至刻度，混勻；

吸取適量上述溶液至另一容量瓶中，加異硫氰酸苯酯，再加甲醇，超聲溶 解，加甲醇/水至刻度，混勻，水浴中加熱，冷卻至室溫；

轉移上述溶液適量至離心管中，加入庚烷，振搖，將甲醇層轉移至HPLC瓶 中，進樣；

所述，步驟三包括以下步驟：

選擇高效液相色譜儀和帶紫外檢測器；

選擇產品參數為C18，50mm×4.6mm，2.7μm的色譜柱；

設定流速為 1.0mL/min；

設定第一流動相為磷酸溶液；第二流動相為乙腈；梯度如下表所示：

設定檢測波長為UV240nm；

設定柱溫為25℃；

設定進樣量為2μL；

氨糖的含量的計算公式如下式所示：

其中：A對、A樣分別為對照品、樣品的峰面積；

W對為對照品的重量，mg；

W樣為樣品的重量，g；

C對為對照品的含量；

氨基葡萄糖鹽酸鹽含量單位為mg/ g；

氨基葡萄糖硫酸鉀鹽含量單位為mg/ g；

氨基葡萄糖含量單位為mg/ g；

標準儲備液的配制為：精密稱定適量的D-氨基葡萄糖鹽酸鹽對照品置一容量瓶中，加入0.1mol/L醋酸鈉溶液，超聲溶解，用0.1mol/L醋酸鈉溶液稀釋至刻度，混勻作 為標準儲備液，其濃度為1.0mg/ml；

所述步驟一中的溶液的配制為：吸取標準儲備液適量至另一容量瓶中，加350μl異硫氰酸苯 酯，再加10ml甲醇，超聲溶解，加甲醇/水至刻度，混勻，80℃水浴中加熱10min，冷卻至室溫； 轉移上述溶液5ml溶液至離心管中，加入5ml庚烷，振搖2min，將甲醇層轉移至HPLC瓶中，進 樣；

所述步驟二中的樣品處理為：稱取一定量的供試品置一容量瓶中，加入0.1mol/L醋酸鈉溶液， 超聲溶解；用0.1mol/L醋酸鈉溶液稀釋至刻度，混勻；吸取上述溶液至另一容量瓶中，加350 μl異硫氰酸苯酯，再加10ml甲醇，超聲溶解，加甲醇/水至刻度，混勻，80℃水浴中加熱 10min，冷卻至室溫；轉移上述溶液5ml溶液至離心管中，加入5ml庚烷，振搖2min，將甲醇層 轉移至HPLC瓶中，進樣。