[發明專利]MMHRL1轉基因小鼠肝腫瘤細胞系的建立及應用

有效

• 申請號: 201611160012.6
• 申請日: 2016-12-15
• 公開（公告）號: CN106635999B
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 王愛國;劉要甫;樊婷婷;王靖宇;王福金
• 申請（專利權）人: 大連醫科大學
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 沈陽銘揚聯創知識產權代理事務所(普通合伙) 21241
• 代理人: 屈芳

本發明提供了H?ras12V轉基因雄性小鼠肝腫瘤細胞系MMHRL1的建立和應用。具體地，本發明提供的所述H?ras12V轉基因雄性小鼠肝腫瘤細胞系MMHRL1的性狀穩定，可穩定多次傳代，并適用于建立肝腫瘤動物模型，是肝癌的基礎和臨床前期應用研究的理想細胞系。另外，該H?ras12V轉基因雄性小鼠肝腫瘤細胞系MMHRL1表達H?ras突變癌基因及具有高激活的Ras/MAPK和PI3K/AKT/mTOR信號通路。本發明還提供了該細胞系在建立模型動物、篩選藥物等方面的應用。

技術領域

本發明涉及生物學和腫瘤學領域，更具體地涉及新型H-ras12V轉基因雄性小鼠肝腫瘤細胞系MMHRL1、及建立方法和應用。

背景技術

人類疾病的發生和發展是一個非常復雜的過程。深入研究各類疾病的發病機制及臨床藥物治療效果，以達到預防和治愈各種疾病的目的，是人類堅持不懈的奮斗目標。但基于人道主義，不能采用直接對患者進行實驗的方法。而遵循動物保護法，可以通過動物實驗對各類疾病發生發展的規律和生命現象進行深入研究，以便達到控制人類疾病的發生發展進程，緩解患者的病痛，直至治愈疾病的目的。

在人類長期的摸索實踐中發現，臨床疾病研究將健康人體和患病人體作為研究對象難以推動醫學的快速和深入發展，而且存在人文、倫理、道德等諸多問題。另外，臨床疾病研究還存在大量樣本積累和長時間觀察等局限性。

人類疾病動物模型(Animal modle of human diseases)是指生物醫學研究中建立的具有人類疾病表現的實驗動物和材料。通過人類疾病動物模型研究人類疾病的發生和發展規律以及治療措施是現代生物醫學研究中至關重要的實驗方法和手段。其中，細胞培養已有百余年的歷史，是進行體外基礎醫學研究的重要方法。

隨著人們生活方式的改變、社會工業化進程和壽命的延長，腫瘤發病率也隨之升高，已成為威脅人類生命健康的主因之一。肝癌號稱“癌中之王”，是我國重點的防治病患，但其病因繁多、過程復雜、治愈率差，機制尚不清楚，仍有待于深入闡明。

目前，建立的人類肝癌細胞系已有數十種之多，但由于各個肝癌細胞系的來源背景復雜，分子機制各異，不利于對病因進行精準分析。另外，這些細胞系還存在成瘤能力有限、傳代不穩定等不足，也不利于肝腫瘤的基礎研究。小鼠是典型的人類疾病動物模型，可以通過建立單一病因誘發的原發性肝腫瘤動物模型對肝癌的病因學進行深入剖析。但由于小鼠的體內實驗費用高、耗時耗力，并且影響因素復雜，急需建立相應的小鼠肝腫瘤細胞系。但相比之下，小鼠肝腫瘤細胞系的建立較為困難。因此，目前可應用的小鼠肝腫瘤細胞系屈指可數。

所以，本研究領域迫切需要研發病因明確、傳代穩定、高成瘤性、適用于建立多種動物模型的小鼠肝腫瘤細胞系。

發明內容

本發明目的在于為肝腫瘤基礎研究和臨床治療提供一種肝腫瘤細胞系，該細胞系具有傳代穩定、成瘤性好、適用于建立多種肝腫瘤動物模型。

本發明的另一個目的在于提供所述的H-ras12V轉基因雄性小鼠肝腫瘤細胞系的制備方法以及用途。

在本項發明的第一方面，提供了一種H-ras12V轉基因雄性小鼠肝腫瘤細胞，所述肝腫瘤細胞是H-ras12V轉基因雄性小鼠肝腫瘤細胞MMHRL1，它保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏號為CCTCC NO:C2016103。

在本發明的第二方面，提供了本發明第一方面中所描述的H-ras12V轉基因雄性小鼠肝腫瘤細胞的子代細胞，所描述子代細胞能夠導致裸鼠形成肝腫瘤。

在另一優選例中，所描述的子代細胞基本保留或完全保留親代H-ras12V轉基因雄性小鼠肝腫瘤細胞MMHRL1的特性。